BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN A. Validasi Metode .

BAB IVHASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASANA. Validasi Metode AnalisisValidasi metode analisis yang dilakukan sesuai dengan jenis dan metodepengujian yang divalidasi yaitu penentuan akurasi dan presisi. Penentuan batasdeteksi (LOD) dan penentuan kuantifikasi (LOQ) tidak dilakukan karena jenis danmetode pengujian masuk kedalam kategori 1 dimana disebutkan komponenmaupun substansi bahan baku obat atau bahan aktif (termasuk pengawet) padahasil akhir farmasetika. Menurut United State Pharmacopeia (USP), validasimetode dilakukan untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik,reprodusibel, dan tahan pada kisaran analit yang dianalisis . Hasil penentanakurasi dan presisi dapat dilihat pada Tabel 2.Tabel 2. Parameter validasi metode analisis kurva kalibrasi NaringeninParameterKoefisien determinasi (R2)Koefisien Relasi (R)Perolehan kembali (Recovery)Koefisien Variasi (CV)Hasil0,99570,997998,65 %0,0204 %1. LinearitasTujuan linearitas yaitu untuk mengetahui seberapa baik kurva kalibrasiyang menghubungkan antara respon (y) dan konsentrasi (x) pada beberapa serilarutan baku. Kurva kalibrasi ini kemudian digunakan untuk penentuan regresilinearnya yang berupa persamaan y bx a, dimana x adalah konsentrasi, y adalahrespon, a adalah intersep y yang sebenarnya dan b adalah slope yang sebenarnya.Tujuan dari dibuatnya regresi adalah untuk menentukan estimasi terbaik untukslope dan intersep y sehingga mengurangi residual error, yaitu perbedaan nilaihasil percobaan dengan nilai yang diprediksi melalui persamaan regresi linear.Nilai linearitas yang baik adalah 0,99 r 1 (Gandjar & Rohman, 2013).Hasil validasi metode analisis dipengaruhi oleh konsentrasi Naringeninyang menghasilkan serapan lebih dari 99%, ditunjukkan dari nilai koefisien30

31determinasi (R2) 0,9957. Koefisien korelasi yang didapatkan dari kedua kurvakalibrasi ini menunjukkan hasil yang linier karena memenuhi kriteria penerimaanmenurut Association of Official Analitytical Chemis (AOAC) yaitu nilai koefisienkorelasi 0,99.2. Penetapan PresisiNilai presisi menunjukan seberapa dekat suatu hasil pemeriksaan biladilakukan berulang. Ketelitian (presisi) ditentukan berdasarkan nilai koefisienvariasi (KV atau CV) dimana nilai CV yang baik adalah 2% ((Harvey, 2000).Hasil pengujian menunjukkan bahwa metode spektrofotometri UV yangdigunakan untuk penetapan kadar Naringenin dalam dapar fosfat pH 7,4 memilikipresisi yang baik pada konsentrasi tinggi, sedang, dan rendah karena memilikinilai CV sebesar 0,0204 %.3. Penetapan AkurasiAkurasi (kecermatan) didefinisikan sebagai kesesuaian antara hasilanalisis dengan nilai acuan yang dapat diterima yang dinyatakan sebagai persenperolehan kembali (recovery). Persen perolehan kembali adalah angka yangmenunjukkan besarnya penambahan standar yang mampu diidentifikasi kembalidengan suatu metode. Nilai perolehan kembali bergantung pada matriks sampel,prosedur proses sampel, dan konsentrasi cemaran. Penetapan proses akurasipeneliti menggunakan tiga macam konsentrasi yaitu 80%, 100%, dan 120%. Nilairecovery yang diperoleh pada rentang % recovery berdasarkan Association ofOfficial Analytical Chemists (2002) yaitu antara 85-115%. Berdasarkan hasil yangdiperoleh, nilai recovery Naringenin dalam dapar phospat pH 7,4 sebesar 98,65 %sehingga metode yang digunakan memiliki akurasi yang baik.B. Penentuan Panjang Gelombang MaksimumScanning panjang gelombang maksimum dari Naringenin dilakukan padalarutan induk Naringenin dengan konsentrasi 10 µg/mL pada panjang gelombang400-200 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Panjang gelombangmaksimum diperoleh dari panjang gelombang yang memiliki serapan terbesar.Hasil panjang gelombang maksimum Naringenin menggunakan spektrofotometer

32UV-VIS menunjukkan panjang gelombang 322 nm dengan nilai serapannyasebesar 0,7856 nm. Hasil panjang gelombang maksimum Naringenin padalampiran 3a.C. Pembuatan Kurva KalibrasiSeri konsentrasi Naringenin yang dibuat yaitu pada 2, 4, 6, 8, dan 10 µg/mLdari larutan baku 100 µg/mL dengan pengukuran serapan menggunakanspektrofotometer UV-VIS sebanyak empat kali replikasi. Luas area diplotkandengan masing-masing konsentrasi untuk membuat persamaan regresi linierdengan persamaan y bx a. Dari kurva hubungan antara luas area dankonsentrasi akan diperoleh nilai koefisien korelasi (r) sebagai parameter untukmenentukan linieritasnya. Penentuan persamaan regresi linear dengan nilai x yaitukonsentrasi, y adalah absorbansi. Hasil persamaan regresi linear yang diperolehyaitu y - 0,032 0,0976x dimana nilai koefisien korelasi (r) sebesar 0,9957. Halini menunjukkan bahwa metode yang digunakan memenuhi persyaratan metodeyang baik dari segi linearitas, yaitu persyaratan data linearitas yang dapat diterimaadalah jika memenuhi nilai koefisien korelasi (r) mendekati 0,999 (Mulja danHanwar, 2003).1,0000,900y 0,0976x - 0,032R² si (µg/mL )Gambar 11. Kurva kalibrasi Naringenin pelarut dapar fosfat pH 7,4.

33D. Pembuatan dan uji karakterisasi basis solid SNEDDSTabel 3. Rancangan Formula solid SNEDDS NaringeninFormulaStearin13131234Komposisi solid SNEDDS (bagian)PEG 1000Kolliphor-EL4,514,514,544,54Pembuatan solid SNEDDS pada penelitian ini dilakukan tanpapenambahan zat pemadat karena basis dipilih untuk bahan-bahan yang sudahbersifat padatan sehingga mampu membentuk solid SNEDDS pada awalpembentukan tanpa adanya penambahan zat pemadat. Basis solid SNEDDS dibuatberdasarkan proporsi bahan pada tabel 3 kemudian dilakuakan karakterisasinanoemulsi pada basis solid SNEDDS berdasarkan emulsification time dan persentransmitan. Parameter uji karakteristik nanoemulsi antara lain emulsification timeterbentuknya nanoemulsi kurang dari satu menit dan persen transmitannanoemulsi mendekati transmitan air yaitu 100%. Hasil pembuatan basis solidSNEDDS dapat dilihat pada lampiran 8 dan hasil karakterisasi nanoemulsi basissolid SNEDDS dapat dilihat pada tabel 4.Tabel 4. Hasil karakterisasi basis solid SNEDDSKomponen solid 4FormulasolidSNEDDS1234Waktu Emulsifikasi (detik)50Karakterisasi basis solid SNEDDSEmulsification time Transmittan(detik)(%)9,00 145,47 0,2115,00 18,67 0,329,67 0,5858,47 0,4245,67 1,1550,10 0,78Diagram Waktu Emulsifikasi Basis45,67403020100159,67912Formula34Gambar 12. Diagram hasil uji waktu emulsifikasi basis solid SNEDDS

34Diagram Persen Transmitan BasisPersen Transmitan FormulaGambar 13. Diagram hasil uji persen transmitan basis solid SNEDDSKarakterisasi berupa emulsification time dan persen transmitan salingberkaitan. Hasil pada kedua karakterisasi tersebut tidak selalu berbanding lurus,jika emulsification timenya tidak selalu pada karakteristik transmitannya bagus,dikarenakan hal ini tidak lepas dari komposisi setiap bahan dalam setiap formula.Penambahan minyak yaitu stearin yang tinggi akan menyebabkan emulsi yangterbentuk tidak transparan sehingga emulsification time yang dihasilkan lama. Haltersebutdapat dibuktikan pada diagram hasil emulsification time basis solidSNEDDS (gambar 12) dimana pada formula 2 dan 4 memiliki emulsification timepaling tinggi dan paling lama karena pada formula 2 dan 4 memiliki kandunganminyak yang lebih tinggi dibandingkan formula lain. Penggunaan Kolliphor-ELsebagai surfaktan yang mampu membentuk sistem nanoemulsi o/w secara spontansaat didispersikan dalam cairan lambung. Semakin tinggi Kolliphor-EL yangberperan sebagai surfaktan akan semakin meningkatkan persen transmitan(Kommuru dkk., 2001). Hal tersebut dapat dibuktikan pada diagram hasilpengujian persen transmitan basis solid SNEDDS (gambar 13) dimana padaformula 3 dan 4 memiliki hasil persen transmitan paling tinggi karena memilikikandungan surfaktan yang lebih banyak dibandingkan formula lain. Hasil tersebutdidukung pula oleh penggunaan ko-surfaktan yaitu PEG 1000 yang dapatmembantu kelarutan dari Kolliphor-EL maupun kelarutan dari obat dalam basisminyak (Amrutkar dkk., 2014). Hasil emulsification time dan persen transmitandapat dianalisis lebih lanjut menggunakan persamaan regresi linier bergandadengan pendekatan 22 factorial design untuk menentukan formula optimum basissolid SNEDDS.

35E. Penentuan Kadar Naringenin Berdasarkan Uji Karakteristik Basis SolidSNEDDSPenentuan kadar Naringenin bertujuan untuk mengetahui banyaknyaNaringenin yang mampu termuat ke dalam basis solid SNEDDS tanpa terbentukkristal. Dosis uji yang digunakan yaitu 20 mg, 25 mg, dan 50 mg Naringenindiinkoporasikan dalam 1 gram basis solid SNEDDS pada formula optimumkemudian diamati ada atau tidaknya kristal. Penentuan formula basis solidSNEDDS yang optimum dipilih berdasarkan parameter emulsification time danpersen transmitan. Hasil pengujian emulsification time dan persen transmitankemudian dianalisis menggunakan pendekatan 22 factorial design, sehinggadiperoleh formula optimum yaitu pada formula 3. Hasil analisis dapat dilihat padalampiran 4 a dan b.Pengamatan kristalinitas Naringenin dalam basis solid SNEDDSmenunjukkan bahwa pada dosis 20 mg Naringenin tidak ditemukan adanyakristal, sehingga Naringenin yang dimuat dalam 1 gram basis solid SNEDDSsebanyak 20 mg. Hasil pengujian dapat dilihat pada gambar 14 dan gambar 15.Gambar 14. Naringenin 20mg 1 g basis solid SNEDDSGambar 15. Basis solid SNEDDS

36F. Pembuatan solid SNEDDS NaringeninTahap pertama dalam pembuatan solid SNEDDS Naringenin adalahditimbang semua bahan. Konsentrasi Naringenin dijaga konstan pada semuaformulasi sesuai dengan hasil uji kadar Naringenin dalam basis solid SNEDDSyaitu 20mg/g. Campuran minyak, surfaktan, dan kosurfaktan sebagai basis solidSNEDDS dibuat dengan perbandingan sesuai proporsi formulasi terpilih.Naringenin ditimbang akurat dan dicampurkan dalam Stearin, kemudiancampuran surfaktan dan kosurfaktan ditambahkan ke dalam campuran obatminyak. Tahap kedua, campuran bahan dihomogenkan menggunakan magneticstirer selama 15 menit dengan kecepatan 700 rpm, setelah itu disentrifugasiselama 15 menit dengan kecepatan 3500 rpm.G. Uji Karakteristik Nanoemulsi solid SNEDDS NaringeninPengujian karakterterisasi nanoemulsi solid SNEDDS Naringenin meliputiemulsification time,persen transmitan, profil disolusi, dan profil difusi. Pengujianini bertujuan untuk mengetahui bahwa sediaan nanoemulsi memenuhi syarat danstabil. Parameter uji karakteristik nanoemulsi antara lain emulsification timeterbentuknya nanoemulsi kurang dari satu menit, persen transmitan nanoemulsimendekati transmitan air yaitu 100%, nilai AUC dan Q yang stabil dan semakinbesar dengan bertambahnya waktu, dan jumlah obat terdifusi yang semakin besardengan bertambahnya waktu . Hasil karakteristik emulsification time dan persentransmitan tertera pada tabel 5. Hasil karakterisasi tersebut kemudian dianalisisdengan pendekatan 22 factorial design untuk menentukan pengaruh serta proporsiformula optimum Stearin dan Kolliphor-EL pada solid SNEDDS Naringenin.Tabel 5. Hasil karakterisasi solid SNEDDS NaringeninKomponen solid SNEDDSFormula 4,54,51144Karakterisasi komponensolid SNEDDS NaringeninPersenEmulsificationtransmitantime (detik)(%)14,67 0,5833,97 0,3523,33 1,535,17 0,1517,67 0,5840,27 0,2549,33 1,1538,40 0,36

37Waktu emulsifikasi (detik)60,0Waktu emulsifikasi solid SNEDDS 0,0Formula Solid SNEDDS NaringeninGambar 16. Diagram hasil pengujian emulsification time solid SNEDDS NaringeninPersen transmittan solid SNEDDS NaringeninPersen transmitan ormula Solid SNEDDS NaringeninGambar 17. Diagram hasil pengujian persen transmitan solid SNEDDS NaringeninEmulsification time dan persen transmitan menjadi parameter pentingdalam pengujian karakteristik solid SNEDDS Naringenin karena dari keduaparameter tersebut dapat diketahui bahwa sediaan nanoemulsi memenuhi syaratdan uji stabilitas. Emulsification time kurang dari satu menit untuk terbentuknyananoemulsi dan persen transmitan nanoemulsi mendekati transmitan air yaitu100%. Semakin rendah emulsification time dan semakin tinggi nilai persentransmitan maka akan semakin baik karakterisktik nanoemulsi yang dihasilkan.Hasil emulsification time dan persen transmitan solid SNEDDS Naringenin.terterapada tabel 5.