Oleh KHAIRANI IDAH MOKHTAR - COnnecting REpositories
COREMetadata, citation and similar papers at core.ac.ukProvided by Repository@USMANALISIS GENETIK MOLEKUL DAN IMUNOFENOTIP PENYAKIT NON·HODGKIN'S LYMPHOMA DI KELANTANOlehKHAIRANI IDAH MOKHTARTesis yang diserahkan untuk memenuhikeperluan bagi Ijazah Sarjana SainsDisember 2001
DedikasiDitujukan khas buat suami, Mohamed Saufi dan anakanda Maisarah. Juga buat ayahandadan bonda yang amat dikasihi dan dihormati; Tuan Hj Mokhtar Hassan dan Hjh WanHasnah Wan Ismail.Terima kasih di atas sega/a sokongan dan galakan yang berpanjangan.
PENGHARGAANSyukur Alhamdulillah diucapkan ke hadrat ALLAH· S.W.T. kerana dengan izinNYA tesis inidapat disiapkan dalam jangkamasa yang ditetapkan.Ribuan terima kasih dan penghargaan yang tak terhingga buat penyelia-penyelia sayaiaitu Prof. (Dr). Abdul Aziz Saba dan Prof. Madya (Dr). Mohd Nizam Isa di atas segal atunjuk ajar, nasihat, cadangan serta masa yang telah diberikan dalam memastikan kajiandan tesis ini dapat disiapkan dengan sempurna. Segala ilmu pengetahuan yang telahdiperolehi sepanjang menjalankan kajian dan menyiapkan tesis ini akan saya manfaatkandengan sebaik mungkin. Penghargaan juga kepada geran jangka panjang IRPA-RM7(390/9606/1012) dan geran jangka pendek-USM (391/9619/1019) sebagai sumberkewangan dalam memastikan pelancaran perjalanan projek ini. Anugerah biasiswa RLKAoleh pihak USM adalah amat dihargai.Saya juga menghargai pegawai sains dan juruteknologis makmal perubatan yang telahbanyak membantu dan memberi nasihat secara langsung atau tidak langsung dalammemastikan kajian ini dilakukan dengan sempurnatermasuk En. Kholid Ali dan Pn.Rashidah Mohd. Yatim serta En. Rosli Jusoh dan En. Ismail Manan (Jab. Patologi), Pn.Azma Hayati Abdullah dan En. Jamarudin Mat Asan (Jab. Imunologi), En. Mohd. RosSidek, Pn. Siti Fatimah Ramli dan Pn. Nor Atifah Adam (Pusat Genom Manusia).Penghargaan juga diberikan kepada semua kakitangan PGM dan Jab. Imunologi.Suat teman-teman seperjuangan; Aziz, Che Ismail, Ina, Along, Ja dan Yulia, galakan danbantuan anda semua amatlah dihargai. Terima kasih di atas segala-galanya. HanyaALLAH yang membalas segala jasa dan budi baik kalian.ii
SENARAI PEMBENTANGAN KERTAS KERJAPembentangan kertas kerja oral:1) Tajuk:Lineage assignment in lymphoma: Immunophenotyping by flowcytometry compared with immunohistochemistry.Penulis:Khairani Idah Mokhtar, Nicholas Jackson, Meor Zamari Meor Kamal,Hasnan Jaafar, Abdul Aziz Saba, T. Kannan dan Ishak Mat.Tempat:3 National Conference on Medical Sciences, Pusat Pengajian SainsPerubatan,Universiti Sains Malaysia.Tarikh:25-26 Mei, 1997.2) Tajuk:Detection of immunoglobulin gene rearrangements in B-lineage NonHodgkin's lymphoma (NHL) using polymerase chain reaction (peR)Penulis:Khairani Idah Mokhtar, Abdul Aziz Baba, Mohd Nizam Isa, Meor ZamariMeor Kamal, Anim Zainuddin.Tempat:4thTarikh:8-9 Jun, 1998.3) Tajuk:Immunophenotypic analysis of lymphomas: Lineage assignment inlymphomas by flow cytometry compared with immunohistochemistry.Penulis:Khairani Idah Mokhtar, Abdul Aziz Saba, Hasnan Jaafar dan Ishak Mat.Tempat:Malaysian Society for Immun9109Y: 3 Scientific Meeting and AnnualGeneral Meeting. Pusat Pengajian Sains Perubatan, Universiti SainsMalaysia.Tarikh:8 Ogos, 1999.rdNational Conference on Medical Sciences,Pusat Pengajian SainsPerubatan, Universiti Sains Malaysia.rdiii
4) Tajuk:Detection of clonal lymphoid population by IgH chain generearrangement and immunophenotyping in malignant lymphomas.Penulis:K.I. Mokhtar, A.A. Saba, I. Mat, M.N. Isa.Tempat:151 Asean Conference on Medical Sciences, Organised by USM DanKerjasama IMT-GT (Indonesia-Malaysia-Thailand Growth Triangle).Renaissance Kota Sharu, Kelantan.Tarikh:18-21 Mei, 2001.Pembentangan kertas kerja poster:1) Tajuk:P53 immunohistochemical staining in Non-Hodgkin's lymphoma(NHL).Penulis:Khairani Idah Mokhtar, Abdul Aziz Saba, Hasnan Jaafar, Meor ZamariMeor Kamal, Ishak Mat.Tempat:5 National Conference on Medical Sciences,Pusat Pengajian SainsPerubatan,Universiti Sains Malaysia.Tarikh:4-5 Mei, 1999.2) Tajuk:Clinical significance of p53 protein expression in Non-Hodgkin'slymphoma among Malaysian patients.Penulis:A. Saba, M. Khairani, H. Jaafar.Tempat:ECCO 10: The European Cancer Conference, Vienna.Tarikh:12-16 September, 1999.th(Abstrak diterbitkan di dalam The European Journal of Cancer, Vol. 35Supplement 4 (September): 1999)iv
SENARAIKANDUNGANKandunganMuka suratTAJUKDEDIKASIPENGHARGAANiiSENARAI PEMBENTANGAN KERTAS KERJAiiiSENARAIKANDUNGANvSENARAI vABSTRACTxviiBAB 1 PENGENALAN11.1Epidemiologi limfoma secara umum11.2Malignansi limfoid41.3Perkembangan sel limfoid1.3.1 Perkembangan sellimfosit B1.3.2 Perkembangan sellimfosit T5591.4Penyusunan semula gen imunoglobulin rantai berat (lgH)dan reseptor sel-T (TCR)111.5Pengelasan NHL dan sejarah tatanama151.6Kaedah baru dalam pengkelasan limfoma1.6.1 Analisis flow sitometri dalam penentuan lineaj NHL1.6.1 (a)Kaedah penyediaan sampel bagi analisisflow sitometri1.6.1 (b)Perbandingan di antara analisis flow sitometridan imunohistokimia dalam pendiagnosanlimfoma1.6.1 (c)Objektif kajian2121252829v
1.6.21.7Penggunaan kaedah tindak balas rantai polimerase(PCR) di dalam pengesanan penyusunan semulagen imunoglobulin rantai berat (lgH) dan reseptor sel-T(TCR) dalam NHL1.6.2(a)Aplikasi diagnosis dalam analisispenyusunan semula gen reseptor antigen1.6.2(b)Penggunaan kaedah biologi molekuldalam pengesanan penyusunan semula genreseptor antigenKaedah pemblotan Southern1.6.2(b)(i)1.6.2(b)(ii)Kaedah tindak balas rantai polimerase (PCR)1.6.2(c)Objektif kajianPengesanan pengekspresian protein p53 dan bcl-2menggunakan kaedah pewarnaan imunohistokimia dalam NHL1.7.1 P53 dan tumorigenesis1.7.1 (a)Fungsi p53 dalam mengawal kerosakan DNAdan apoptosis1.7.1 (b)Pengekspresian p53 pada tisu limfoma malignan1.7.1 (c)Kaedah pengesanan pengekspresian p53 padakanser manusia1.7.21.7.32.230313133363737383942Bcl-2 dan tumorigenesis1.7.2(a)Fungsi bcl-2 dalam mengawal survival sel danapoptosis1.7 .2(b)Pengekspresian bcl-2 pada tisu limfoma malignan1.7.2( c)Kaedah pengesanan pengekspresian bcl-2 padakanser manusia4345Objektif kajian48BAB 2 BAHAN DAN METODOLOGI AM2.129Bahan-bahan dan kaedah am ujian imunofenotip menggunakankaedah flow sitometri2.1.1 Larutan Hanks' Balance Salt solution (HBSS)2.1.2 Larutan Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.42.1.3 Larutan 0.83% ammonium klorida (NH 4 CI)2.1.4 Larutan fiksatif 1% dalam PBS2.1.5 Larutan Ficoll-Hypaque (1.077g)2.1.6 Senarai antibodi monoklon yang digunakan dalamujian imunofenotipBahan-bahan dan kaedah am analisis molekul bagi ujianpengesanan penyusunan semula gen imunoglobulinrantai berat (lgH) menggunakan kaedah tindak balas rantaipolimerase (peR)2.2.1 Pengekstrakan DNA daripada tisu menggunakan kit464851515151515252535454vi
2.2.22.2.32.2.42.2.52.2.62.2.72.3QIAamp (QIAGEN,USA)Larutan penimbal 10X TBE (Tris-Borate-EDTA)Larutan penimbal pemuat 6X (6X loading buffer)(MBI-Fermentas, USA)Larutan 10% ammonium persulfat (APS)Larutan stok 40% akril/bis (Amresco, USA)2% gel agarosa untuk analisis elektroforesis8% gel poliakrilamida (PAGE) untuk analisis elektroforesisBahan-bahan dan kaedah am analisis pewarnaanimunohistokimia menggunakan antibodi monoklonp53 dan bcl-2 ke atas sampel hirisan tisu parafin2.3.1 Larutan 0.01 M penimbal sitrat pH 6.0(0.01 Citrate Buffer, pH 6.0)2.3.2 Larutan 0.05M Tris Buffered Saline (TBS), pH 7.62.3.3 Larutan pencair antibodi2.3.4 Larutan 3% hydrogen peroksida dalam metanol2.3.5 Larutan alkohol berperingkat2.3.6 Larutan xylena2.3.7 Larutan substrat kromogen DAB(3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride)2.3.8 Larutan 1:10 Poly-L-Lysine (Sigma, USA)2.3.9 Penyediaan sisip kaca55565656575758585959606061616161BAB 3 ANALISIS FLOW SITOMETRI MENGGUNAKAN SAMPELTISU SEGAR SEBAGAI SUATU KAEDAH DALAM PENETAPANLINEAJ NHL633.1PendahuluanObjektif kajian3.1.163643.2Kaedah pewarnaan imunohistokimia pada hirisan tisu parafin643.3Bahan-bahan dan kaedah ujian imunofenotipmenggunakan teknik flow sitometri3.3.1 Kaedah penerimaan sampel tisu dan penyediaanampaian sel tunggal3.3.2 Penglabelan antibodi monoklon ke atas antigenpermukaan sel3.3.3 Penganalisaan data663.4Kriteria untuk penetapan lineaj NHL733.5Keputusan3.5.1 Jenis sampel3.5.2 Keputusan analisis flow sitometriPerbandingan di antara keputusan analisis3.5.2(a)flow sitometri dan analisis imunohistokimia75757777666870vii
3.5.2(b)3.5.2(c)3.5.2(d)3.6Keputusan analisis flow sitometri menggunakankriteria nisbah kappa:lambda 3.0 atau 0.25Keputusan analisis flow sitometri menggunakankriteria majoriti pengekspresian antigenpermukaan sel limfoid BKeputusan analisis flow sitometri menggunakankriteria majoriti pengekspresian antigenpermukaan sel limfoid TPerbincangan80808186BAB 4 PENGESANAN PENYUSUNAN SEMULA GEN IMUNOGLOBULINRANTAI BERAT (IGH) MENGGUNAKAN TINDAK BALAS RANTAIPOLIMERASE (PCR) SEBAGAI SUATU KAEDAH PENGESANANPOPULASI MONOKLON DALAM NHL964.1Pendahuluan4.1.1 Objektif kajian96974.2Bahan-bahan dan kaedah menjalankan analisis biologimolekul bagi pengesanan penyusunan semula gen IgHmenggunakan tindak balas peR4.2.1 Pengumpulan sampet4.2.2 Pengekstrakan DNA4.2.3 Kaedah tindak balas rantai polimerase (peR)4.2.3(a)Tindak balas peR untuk mengesan penyusunansemula gen imunoglobulin rantai berat (lgH)4.2.3(b)Pengesanan produk amplifikasi peR4.2.3(c)Kaedah peR untuk kawalan amplifikasi internal4.2.3(d)Pengesanan produk amplifikasi peR984.3Keputusan4.3.1 Keputusan amplifikasi peR menggunakan primerVH/J H untuk mengesan penyusunan semuta genimunoglobulin rantai berat B 5 PENGESANAN PENGEKSPRESIAN DAN TABURANPROTEIN P53 DAN BCL·2 PADA TISU LIMFOMAMENGGUNAKAN KAEDAH PEWARNAAN IMUNOHISTOKIMIA1245.1Pendahuluan5.1.1 Objektif kajian1241255.2Bahan-bahan dan kaedah pengesanan pengekspresianprotein p53 dan bcl-2 terhadap limfoma menggunakan126viii
kaedah pewarnaan imunohistokimia5.2.1 Jenis-jenis sampel yang digunakan untuk analisisimunohistokimia5.2.2 Penyediaan sampel hirisan tisu pada sisip kaca5.2.3 Kaedah pewamaan imunoperoksidase menggunakanteknik kompleks strept avidin-biotin5.2.4 Penentuan skor pewarnaan imunohistokimia bagipengekspresian dan tabu ran protein p53 dan bcl-2pada sam pel tisu5.2.5 Analisis utusan skor pewarnaan imunohistokimia bagipengekspresian dan tabu ran protein p53 dan bcl-2ke atas tisu limfoma yang telah dikelaskan sebagaiNHL gred tinggi, gred pertengahan dan gred rendah5.3.1 (a)Keputusan pengekspresian dan taburanprotein p53 pada kes NHL5.3.1 (b)Keputusan pengekspresian dan taburanprotein bcl-2 pada kes NHL5.3.1 (c)Keputusan pengekspresian bersamaprotein p53 dan bcl-2 pada kes NHLgred tinggi, pertengahan dan rendah133Perbincangan5.4.1 Pengesanan pengekspresian dan taburan protein p53pad a kes NHL5.4.2 Pengesanan pengekspresian dan ta uran protein bcl2pada kes NHL148148BAB 6 PERBINCANGAN KESELURUHAN1331401461551626.1Ringkasan dan cadangan kajian selanjutnya6.1(a) Bab 36.1(b) Bab 46.1(c) Bab51621621631656.2Kesimpulan keseluruhan167RUJUKAN168ix
SENARAI JADUALMuka suratJadual1.1Pengelasan Updated Kiel191.2Sistem Pengelasan Working Formulation202.1Senarai antibodi monoklon dan jenis label berpendaflour yangdigunakan untuk ujian analisis flow sitometri533.1Antibodi yang digunakan sebagai panel limfoma di dalampewarnaan imunohistokimia untuk menentukan lineaj NHLsetelah diagnosis dilakukan menggunakan pewarnaan H&E653.2Aturan tiub yang dimasukkan dengan antibodi monoklonyang digunakan dalam analisis imunofenotip693.3Bilangan sampel tisu nodus limfa yang digunakan di dalamanalisis flow sitometri dan keputusan diagnosis akhir sampeltersebut763.4Perbandingan di antara keputusan yang diperolehi daripadaanalisis flow sitometri dan ujian histopatologi (HPE)793.5Keputusan analisis flow sitometri dibandingkan ujianhistopatologi menggunakan kriteria nisbah kappa:lambda.Nilai positif pada analisis flow sitometri mewakili 50%pengekspresian sel Iimfoid terhadap antigen permukaan sel Batau sel T833.6Keputusan anal isis flow sitometri dibandingkan dengankeputusan ujian histopatologi menggunakan kriteria majoritipengekspresian antigen permukaan sellimfoid tanpapengekspresian dominan imunoglobulin rantai ringan kappaatau lambda. Nilai positif mewakili 50% sellimfoid adalah positifterhadap penanda permukaan sel limfoid B atau T.843.7Keputusan analisis flow sitometri dibandingkan dengankeputusan ujian histopatologi menggunakan kriteria majoritipengekspresian antigen permukaan sellimfoid tanpapengekspresian dominan imunoglobulin rantai ringan kappaatau lambda. Nilai positif mewakili 50% sellimfoid adalah positifterhadap penanda permukaan sellimfoid B atau T854.1Bilangan dan diagnosis akhir (HPE) sampel tisu yangdigunakan dalam anal isis biologi molekul100x
4.2Jumlah volum reagen yang digunakan dalam setiaptindak balas PCR dan jumlah master mix yang disediakanuntuk 10 tindak balas PCR1054.3Suhu dan masa yang digunakan untuk tindak balas peR1054.4Bilangan sampel yang telah menunjukkan pengesananpenyusunan semula gen IgH menggunakan primer V Hdan JH1095.1Jenis dan bilangan sampel yang digunakan di dalamanalisis imunohistokimia bagi pengesanan pengekspresianprotein p53 dan bcl-21275.2Taburan pengekspresian protein p53 pada kes NHL1355.3Frekuensi skor pengekspresian protein p53 pada sampeltisu limfoma yang telah dikelaskan sebagai NHL gred tinggi,gred pertengahan dan gred rendah mengikut sistemPengelasan Working Formulation1365.4Frekuensi pengekspresian positif dan negatif terhadap proteinp53 pada kes NHL yang telah dikumpulkan sebagai NHL agresifdan NHL indolen1365.5Taburan pengekspresian protein bcl-2 pada kes NHL1415.6Frekuensi skor pengekspresian protein bcl-2 pad a sampeltisu limfoma yang telah dikelaskan sebagai NHL gred tinggi,gred pertenghan dan gred rendah mengikut sistemPengelasan Working Formulation1425.7Frekuensi pengekspresian positif dan negatif terhadap proteinbcl-2 pada kes NHL yang telah dikumpulkan sebagai NHL agresifdan NHL indolen1425.8Kaitan di antara pengekspresian bersama p53 dan bcl-2dengan kes NHL daripada gred yang berbeza147xi
SENARAIRAJAHMuka suratRajah1.1Peringkat perkembangan sel B serta penanda permukaansel B yang diekspreskan semasa proses perkembangantersebut81.2Peringkat pembezaan dan pembesaran sel T101.3lIustrasi proses penyusunan semula gen imunoglobulinrantai berat (lgH)141.4Carta aliran menunjukkan kaedah utama yang terlibatdi dalam kajian ini503.1Plot titik FSC melawan SSC menunjukkan taburan sel-selmononukleus yang akan dipagar bagi penganalisaan data.FSC mewakili pembiasan cahaya ke hadapan akanmenunjukkan saiz sel manakala SSC mewakili pembiasancahaya dari sisi akan menunjukkan keadaan granulariti713.2Plot titik bagi sampel ampaian sel tunggal yang dilabelkandengan antibodi isotip Ig G2a (FITC) dan Ig G1 (PE)sebagai tiub kawalan negatif723.3Carta aliran' kaedah penerimaan sampel, penyediaan ampaiansel tunggal dan penglabelan antibodi monoklon ke atasantigen permukaan sel untuk anal isis flow sitometri743.4Contoh keputusan pewarnaan positif terhadap antigenpenanda permukaan sellimfoid CD 19 (93.75%) dan CD 10 (91%)824.1lIustrasi lokasi primer VH dan J H Gen imunoglobulin rantaiberat (lgH) terletak pada kromosom 14q32. Kawasan"Complementary Determining Region III, CDRIII" terdiridaripada segmen-segmen rangkakerja 3 (Framework-3),pelbagai (Diversity, D) dan penyambung (Joining, J)1034.2Carta aliran kaedah penerimaan sampel, pengekstrakanDNA dan anal isis molekul untuk mengesan penyusunansemula gen imunoglobulin rantai berat1064.3Analisis elektroforesis gel agarosa 20/0 ke atas DNAgenomik yang telah diekstrakkan daripada sampeltisu menggunakan kit pengekstrakan DNA"QIAamp Tissue Kit" (QIAGEN, USA)110xii
4.4Analisis gel agarosa 2% ke atas produk PCR menggunakanprimer kawalan amplifikasi internal (RS42 dan KM29).Produk PCR diamplifikasikan pada saiz 500bp1114.5Analisis elektroforesis gel poliakrilamida 8% (PAGE)ke atas produk PCR menggunakan primer V H dan J Huntuk mengesan populasi monoklon yang mengalamiproses penyusunan semula gen IgH pada sampel NHL-B.1124.6Analisis gel poliakrilamida 80/0 (PAGE) ke atas produk PCRdaripada kes-kes selain daripada NHL-B yang dikesan telahmenghasilkan keputusan yang positif terhadap penyusunansemula gen IgH1135.1Carta aliran kaedah penyediaan sampel hirisan tisu,pewarnaan imunohistokimia dan pemerhatian sel1325.2Carta bar menunjukkan bilangan dan peratusan kes yangpositif dan negatif terhadap pengekspresian protein p53pada 53 kes NHL yang telah diklasifikasikan mengikutsistem Pengelasan Working Formulation1375.3Carta bar menunjukkan bilangan dan peratusan kes yangpositif dan negatif terhadap pengekspresian protein bcl-2pada 53 kes NHL yang telah diklasifikasikan mengikutsistem Pengelasan Working Formulation143xiii
SENARAIGAMBARFOTOMuka suratGambarfoto5.1Skor positif tinggl, 3 (tabu ran tinggi) iaitu apabila lebih138daripada 75% ( 75%) sel malignan adalah positif.5.2Skor positif pertengahan, 2 (taburan sederhana) iaitu138apabila 26-75% sel malignan adalah positif.5.3Skor positif rendah, 1 (taburan rendah) iaitu apabila kurangdaripada 25% «25 %5.4(a) dan 5.4(b))139sel malignan adalah positif.Skor negatif, atau -ve (negatif) iaitu apabilahanya beberapa sel adalah positif «10%)atau tiada sel malignan positif (-ve).1395.5Skor positif tinggi, 3 (taburan tinggi) iaitu apabila lebihdaripada 750/0 ( 75%) sel malignan adalah positif.1445.6Skor positif pertengahan, 2 (taburan sederhana) iaituapabila lebih 26-75% sel malignan adalah positif terhadapprotein bcl-2.1445.7Skor positif rendah, 1 (tabu ran rendah) iaitu apabila kurang145daripada 25% «250/0) sel malignan adalah positif5.8(a) dan 5.8(b) atau -ve (negatif) iaitu apabilahanya beberapa sel malignan «10%) adalahpositif atau tiada sel malignan yang positif (-ve).Skor negatif,145xiv
ABSTRAKLimfoma bukan Hodgkin (NHL) merupakan suatu keadaan malignansi yang heterogenus.Perkembangan terbaru kaedah-kaedah yang melibatkan bidang imunologi dan biologimolekul telah membantu pendiagnosan dan pengelasan NHL dilakukan dengansempurna. Ciri-ciri pengekspresian protein sepertip53 dan bcl-2 juga memainkanperanan penting dalam sistem pengelasan limfoma. Terdapat tiga objektif ut ma dalamkajian ini. Pertama, melihat keberkesanan penggunaan analisis flow sitometri dalammelakukan penetapan lineaj terhadap NHL menggunakan sampel ampaian sel tunggaldaripada tisu segar. Kedua, mengesan penyusunan semula gen imunoglobulin rantai berat(lgH) sebagai suatu kaedah pengesanan populasi monoklon pada kes NHL menggunakankaedah tindak balas rantai polimerase (PCR). Objektif ketiga ialah melihat pengekspresiandan taburan protein p53 dan bcl-2 pada kes NHL gred yang berbeza menggunakankaedah pewarnaan imunohistokimia.Semua sampel yang digunakan dalam kajian ini telah diperolehi daripada pesakit-pesakityang disyaki menghidap limfoma. Sebanyak 37 sampel nodus limfa segar digunakanuntuk analisis flow sitometri. Penyediaan ampaian sel tunggal dilakukan dan sel-selmononukleus dilabelkan dengan antibodi monoklon. Data dianalisa menggunakan alatanFacSCAN. Pengesanan penyusunan semula gen IgH menggunakan kaedah PCR telahdilakukan ke atas 43 sampel nodus limfa segar atau yang telah disejuk-bekukan. DNAdiekstrakkanmengikut prosedur yang ditetapkan.peR dijalankan menggunakanpasangan primer VH/JH. Populasi monoklon ditunjukkan oleh kehadiran jalur pad a saiz diantara 90-160bp. Pewarnaan imunohistokimia menggunakan antibodi monoklon p53 (007, DAKO) dan bcl-2 (klon 124, DAKO) telah dijalankan ke atas 56 sampel hirisan tisuparafin.xv
Melalui analisis flow sitometri, penetapan lineaj NHL dapat dilakukan pada 11/14 kes NHLB dan 1 kes NHL-T. Melalui kaedah pengesanan penyusunan semula gen IgH, populasimonoklon telah diperhatikan pada 18 daripada 21 kes NHL-B. 2 kes NHL-T dan 2 kespenyakit Hodgkin manakala tiada populasi monoklon dikesan pada kes reaktif. metastatikkarsinoma dan tuberkulo
2.3.4 Larutan 3% hydrogen peroksida dalam metanol 60 2.3.5 Larutan alkohol berperingkat 60 2.3.6 Larutan xylena 61 2.3.7 Larutan substrat kromogen DAB 61 (3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride) 2.3.8 Larutan 1:10 Poly-L-Lysine (Sigma, USA) 61 2.3.9 Penyediaan sisip kaca 61 BAB 3 ANALISIS FLOW SITOMETRI MENGGUNAKAN SAMPEL 63
its original connecting rod before another connecting rod bearing cap is removed. 5. Remove the connecting rod bearing cap with the connecting rod bearing. 6. Inspect the connecting rod bearing for damage. If the connecting rod bearing is damaged, replace all main and connecting rod bearings. a. Acceptable bearing wear (1). b.
NLP Course - Parsing - S. Aït-Mokhtar (Naver Labs Europe) Grammatical function ! syntactic category same syntactic category: proper noun (PROPN) distinct grammatical functions: subject (nsubj) and modifier (nmod) NLP Course - Parsing - S. Aït-Mokhtar (Naver Labs Europe)
Rethinking the Machines We Live In: A Multidisciplinary Course in Architectural Robotics, IEEE Robotics and Automation Magazine, 2014 Mokhtar, Tarek; Green, Keith; Walker, Ian. Giving Form to the Voices of Lay-Citizens: Monumental-IT, an Intelligent, Robotic, Civic Monument, Communications in Computer and Information Science,
Mokhtar, E. (2016).Using design thinking to enhance construction site problem solving [Master's thesis, the American University in Cairo]. AUC Knowledge Fountain. https://fount.aucegypt.edu/etds/311 MLA Citation Mokhtar, Ehab. Using design thinking to enhance construction site problem solving. 2016. American University in Cairo, Master's thesis.
The Fred and Idah Schultz Preserve lies on a peninsula on the eastern coast of Hillsborough Bay, south of the Kitchen Nature Preserve, west of US 41, at the western terminus of Kracker Avenue. The Preserve is located in the southern portion of Section 4 and the southwestern portion of Section 3, Township 3South, and Range 1 19 East.
Contents vi Cisco 800 Series Routers Hardware Installation Guide 78-5373-04 Installing Your Router 2-5 Connecting Ethernet Devices 2-6 Connecting an ISDN Line 2-10 Connecting an IDSL Line 2-13 Connecting a Digital Telephone 2-14 Connecting an Analog Telephone, Fax, or Modem 2-15 Connecting a Terminal or PC 2-17 Connecting the Power Supply 2-18 Mounting Your Router 2-18
John C. Maxwell Contents of Book Part I Connecting Principles 1. Connecting Increases Your Influence in Every Situation 2. Connecting is All About Others 3. Connecting Goes Beyond Words 4. Connecting Always Requires Energy 5. Connecting is More Skill than Natural Talent Part II Conne
BREAKOUT TANK INSPECTION FORM Page 1 of 12 Form-10 Breakout Tank Inspection Form (Rev. 03/17/11 through Amdt. 195-95). . API 653 in proper conformance with the stresses, joint efficiencie (a) of withstanding the internal pressure produced by the hazardous liquid to be stored therein and any anticipated external loads. The repair/alteration history includes all data accumulated on a tank from .
