Pruebas De Susceptibilidad Antimicrobiana

Pruebas de susceptibilidad antimicrobianaCONSIDERACIONES GENERALES Todas las pruebas que se discutirán, dependendel cultivo bacteriano in vitro Requieren de un tiempo relativamente largopara la obtención de resultados (3-7 días) No infieren sobre la susceptibilidad bacterianaen biopelículas Sólo permiten la evaluación de especiescultivables Son aplicables únicamente para cultivos puros

Concentraciones mínimas inhibitorias entración más baja de un fármaco que inhibe el crecimiento visible demicroorganismos después de su cultivo en presencia del agente “Estándar de oro” en pruebas de susceptibilidad para diagnóstico e investigación Uso obligado en casos de endocarditis, meningitis, septicemia, osteomielitis,pacientes inmunosuprimidos, infecciones de prótesis y cuando no ha habido unabuena respuesta a pesar de haber tenido resultado de “S” con antibiogramas En pacientes críticos para quienes se requiere una MIC exacta ( 10 diluciones) Proporciona concentraciones útiles clínicamente Permite establecer puntos de corte de sensibilidad y resistenciaEn comparación a los antibiogramas: Técnicamente más laborioso Requiere mayor tiempo para la obtención de resultados Es más costoso

Concentraciones mínimas inhibitorias (MIC)Suspender encaldoTransferir apozosAjustar D.O.de 104 a 106Caldo con diferentesconc. de 12 antibióticosConc.sugeridas 512 µg/ml16 µg/ml8 µg/ml4 µg/ml2 µg/ml1 µg/ml0.5 µg/ml0.25 µg/ml0.12 µg/ml0.06 µg/ml 0.001 µg/mlIncubar32 µg/ml16 µg/ml8 µg/ml4 µg/ml2 µg/ml1 µg/ml0.5 damicinaVancomicinaEstándares: CLSI (antes NCCLS)EritromicinaAplicación: Bajo número de cepascontra número elevado de antibióticos*Sin antibióticoControl*MetronidazolMÉTODO DE DILUCIÓN EN CALDODeterminar MIC acada antibiótico

Concentraciones mínimas inhibitorias (MIC)IncubarSuspender encaldoAjustar D.O.de 104 a 106MÉTODO DE DILUCIÓN EN AGARAplicación: Elevado número de cepascontra bajo número de antibióticosEstándares: CLSI (antes NCCLS)Transferir apozos (S/A)Control*0.5 µg/ml1 µg/ml2 µg/ml4 µg/ml8 µg/ml16 µg/ml32 µg/mlReplicar enplacas de agarAgar con diferentes conc. de 1 antibiótico*Sin antibióticoDeterminar MICde cada cepa

Concentraciones mínimas inhibitorias (MIC)Suspender encaldoTransferir encéspedIncubarAjustar D.O.de 104 a 106Colocar tiracon antibióticoDeterminarMICsMÉTODO DE TIRAS DE GRADIENTEAplicación: Elevado número de cepascontra elevado número de antibióticos

Interpretación de MICs- “La relatividad de la susceptibilidad”Interpretación clínica de lasusceptibilidad Resultado de la pruebaMIC (µg/ml) Valores de los puntosde corte No tienen utilidad per se Estándares del CLSI Se interpreta considerandolas concentraciones que elfármaco puede alcanzar enel sitio de la infeccióndespués de administraruna dosis terapéutica Basados en lasconcentraciones que elfármaco puede alcanzar enel sitio de la infeccióndespués de administraruna dosis terapéuticaFARMACOCINÉTICA Dosis, distribución y vida media del fármaco: factores quedeterminan la concentración alcanzable en el sitio de infección Difiere de fármaco a fármaco, de sitio a sitio y de paciente a paciente Por lo tanto, los puntos de cortes son diferentes para cada agente: Una MIC baja puede representar “R” a un fármaco y una MIC elevada“S” a otro por diferencias en sus puntos de corte

Interpretación de MICs- Puntos de corte e índices PDÍNDICES FARMACODINÁMICOS (PDI)PUNTOS DE CORTE (PC) Consideran la cinética y dinamia delfármaco junto con la MIC para determinarsu efectividad MIC PC(1) “S” MIC PC(3) “R” PC(2): Puede ser efectivo si la infección selocaliza en sitios que concentran alfármaco ó cuando se pueden administrardosis altas con seguridad Se compara el “coeficiente del punto decorte” (MBQ) con el valor de la MIC MBQ Punto de corte(1) MIC MIC y MBQ: eficacia del fármacoPUNTOS DE CORTEAntibióticoA. ImipenemB. AmpicilinaC. CefotaximaD. ClindamicinaE. MetronidazolSusceptible(1) 8 2 2 16 12Intermedio Resistente(2)(3)16 324 84 832 6424 SS(Concentraciones en µg/ml)

Interpretación de MICsRRRIIRRSIISSFármaco AFármaco BSFármaco CA. ImipenemB. AmpicilinaC. CefotaximaD. ClindamicinaE. MetronidazolSusceptible(1) 8 2 2 16 12Intermedio Resistente(2)(3)16 324 84 832 6424 48SFármaco DPUNTOS DE CORTEAntibióticoIFármaco S(Concentraciones en µg/ml)

Concentraciones mínimas bactericidas (MBC)DefiniciónConcentración más baja de un fármaco capaz de matar microorganismos, sedetermina después de subcultivar en agar sin el agente, muestras de caldo sincrecimiento visible en una serie de diluciones para la determinación de MICAplicación Se utiliza con menor frecuencia que las MICs Uso obligado en casos de endocarditis, meningitis y en pacientes críticosVentajas Proporciona concentraciones útiles clínicamente Permite identificar el efecto “bactericida” y “bacteriostático” del fármacoDesventajasEn comparación a MICs y antibiogramas: Técnicamente más laborioso Requiere mayor tiempo para la obtención de resultados Es más costoso

Concentraciones mínimas bactericidas (MBC)Subcultivo en agarsin antibióticoIncubarMIC: método dedilución en caldoDeterminar MBC

Interpretación de MBCsAntibióticoEjemplosEfectoPenicilinas‐ Amoxicilina‐ AmpicilinaBactericidaCefalosporinas‐ Cefotaxima‐ CefalexinaBactericidaCarbapenems‐ Imipenem‐ MeropenemBactericidaAminoglucósidos‐ Amikacina‐ GentamicinaBactericidaQuinolonas‐ Ciprofloxacina‐ LevofloxacinaBactericidaLincosaminas‐ ClindamicinaBacteriostáticoMacrólidos‐ Azitromicina‐ ClaritromicinaBacteriostáticoTetraciclinas‐ Doxiciclina‐ MinociclinaBacteriostáticoNitroimidazoles‐ MetronidazolBacteriostáticoFenólicos‐ ChloramfenicolBacteriostático“Bactericida” vs. “Bacteriostático” Bactericida: MBC 4 veces MIC Bacteriostático: MBC 4 veces MIC

Antibiogramas- Prueba de Kirby-BauerDefiniciónMétodo para determinar la susceptibilidad antimicrobiana de bacterias, basado enel tamaño de zonas de inhibición de crecimiento alrededor de discos impregnadoscon diferentes fármacos en un sembrado en céspedAplicación Determinación rápida (presuntiva) de la susceptibilidad de microorganismos adiferentes antimicrobianos En casos donde se requiere un resultado rápido para la selección y administracióninicial del antimicrobianoVentajasDesventajasEn comparación a MIC y MBC: Menos laborioso y costoso Requiere menos tiempo para la obtención de resultados No proporciona concentraciones útiles clínicamente Los resultados son un indicador pobre de la efectividad clínica del agente

Antibiogramas- Prueba de Kirby-BauerSuspender encaldoSembrado encéspedAjustar D.O.de 104 a 106Colocar discosIncubarMedir zonas deinhibición

Interpretación de antibiogramasINTERPRETACIÓN ESTÁNDAR Diámetro 18 mm o radio 6 mm “S”Diámetro 18 mm o radio 6 mm “R”Lo anterior considera discos de 6 mmLos puntos de corte varían específicamente para algunos MO y/o antibióticosLa interpretación debe basarse en los estándares vigentes del CLSIEl punto de corte “intermedio” se interpreta igual que en MICsEjemplo para E. coli y otrosbacilos entéricos aConc. endisco (µg)301030103075510PUNTOS DE CORTEResistente 14 13 14 12 14 14 10 14(Diámetro en mm)Susceptible 17 17 18 15 19 20 16 15

Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana CONSIDERACIONES GENERALES Todas las pruebas que se discutirán, dependen del cultivo bacteriano in vitro Requieren de un tiempo relativamente largo para la obtención de resultados (3-7 días)