Cytologie Hématologique Automatisée Au Laboratoire - AFTLM
Cytologie hématologiqueautomatisée au laboratoire-Indications du frottis sanguin-Intérêts et limites des lecteurs de lames automatisés04 mars 2017Dr Christophe Marzac, Laboratoire d’Hématologie, Gustave Roussy, Villejuif
RAPPELS:Apports du frottis sanguin
VALEURS QUANTITATIVES NORMALESValeurs normales des paramètres tesRéticulocytesNomUnitésHommes FemmesNouveauxnésEnfants 10 ansNumération desglobules blancs109/l4 - 104-1012 - 255 - 11Numération desglobules rougesTaux d'hémoglobineTaux d'hématocriteVolume globulairemoyen1012/l4.4 - 5.63.7 - 5.05.5 - 63.2 - 4g/dl%13 - 1740 - 5012 - 1636 - 4514 - 19.550 - 6410 - 1332 - 40µ3 ou fl80 - 10080 - 10010580109/Lpgou G/L 27 - 321012/L ou T/L27 - 32382732 - 3632 - 36363411 - 1611 - 16Teneur corpusculairemoyenne en HbCCMHConcentrationcorpusculaire en HbIDGRIndice de distributiondes GRg/dl150 - 40025 - 90Ces valeurs quantitatives sont la base du raisonnement en hématologie3
L’hématocrite et le calculdes constantes érythrocytairesHématocrite : (%)Représente le volume occupé par les GR dans le sang totalVolume globulaire moyen :VGM Hte x 10 / nb GR(fL femtolitre [10-15])Représente la « taille » de l’hématiePLASMAGRConcentration corpusculaire moyenne en hémoglobine :CCMH Hb x 100 / Hte(% g pour 100ml g/dL le tauxd’Hb dans les GR après élimination du plasma)Teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine :TCMH Hb x 10 / nb GR(pg picogramme [10-12])Représentent le « contenu » en hémoglobineLa présence de GR agglutinés fait varier VGM et TCMH4
Le nombre de globules rouges est indépendantdu taux d’Hémoglobine et de l’hématocriteLes trois paramètres de mesure des GRNb GR : NHb : NHte : N Nombre de GR Taux d’hémoglobine HématocriteNb GR : NHb : Hte : Anémie Microcytaire:Carentielle: Nb GR dimThalassémie: Nb GR augNb GR : Hb : NHte : NMacrocytose sans anémie:éthylisme, hypothyroïdie,antifoliques (Bactrim, AZT.)5
Les technologies diffèrent, mais l’impédance est la base ducomptage cellulaire et de la mesure des volumesSysmex XE 2100 Mesure par impédanceAdvia 120 (Siemens) Cytométrie en flux après sphérisationisovolumétrique des GR Mesure des GR Mesure du V et de la CH de chaque GR Calcul de l’Hte, TCMH et CCMH c Mesure des GR et de l’HteCalcul du VGM (Hte/nb de GR)Calcul de la CCMH (Hb/Hte)Comptage des érythroblastes60 fl 120 flVolume (V)28 g/dl 41 g/dlConc en Hb (CH)Une distribution anormale doit menerÀ la réalisation d’un frottis sanguin6
Sysmex XE 2100 / Canal DIFF analyse des globules blancs Lyse des GR et des plaquettes Mesure des globules blancs par cytométrie de flux, diffraction et fluorescenceavec fluorochrome à ADN et ARN (2ème comptage comparé au précédent) Quantification des différentes populations leucocytaires, de la myélémie et descellules hyperbasophiles7
DONNES QUANTITATIVES QUALITATIVES NORMALES:AUCUNE INDICATION à LA REALISATION DU FROTTIS SANGUIN
Données morphologiques:éléments normauxLymphocytes 90%petits lymphos (B/T/NK) 10% LGL (T/NK)Lymphocytes 75%T 20%B 5% NKLymphoPNN,plqLGLMonoBasoPNéo
Analyse des globules blancs: nuages anormauxTOUS LES GRAPHES ANORMAUX NECESSITENT L’ANALYSE DU FROTTIS SANGUINMAIS PAS NECESSAIREMENT DE REFAIRE UNE FORMULE MICROSCOPIQUE 10
Données morphologiques en microscopie classique:éléments anormalement présentsLymphocytesLALleucémie aiguë lymphoblastique?DECRIVEZ et NOMMEZ LA CELLULEBlastesBLASTES CELLULES MONONUCLEEES: formule microscopique indispensable
Syndrome mononucléosiqueTriade: Grandes cellules hyperbasophiles à noyau réniforme, grains parfois visibles, LGL activés corps apoptotiques; Herpesvirus: HSV, VZV,EBV , HIV ,CMVLyACLHLyLyCLHCA?CAANSM CNQ2012CELLULES HYPERBASOPHILES et PLASMOCYTES:Souvent mélangés aux lymphocytesParfois comptés en cellules hyperfluorescentes
LLCleucémie lymphoïde chroniqueAprès 50 ans, adénopathies bilatérales symétriquesLymphocytose isolée 5 G/L, parfois anémie, thrombopénie (auto-immunes )chromatines mottéesNOMBREUSES Ombres de GumprechtFORMULE MICROSCOPIQUE à PROSCRIREou bien compter les ombres en lymphocytes, compter à la base du frottis
MYELOFIBROSE: Erythroblastes myélémie- dacryocytesAnémie (9,5 g/dL) normochrome normocytaire (88 fl), thrombopénie, GB 9.1G/lRéticulocytes 140 G/L, bilan d’hémolyse négatifFORMULE AUTOMATE souvent juste (myélémie globale, érythroblastes)14MAIS: DESCRIPTION indispensable pour le diagnostic
LMC Leucémie myéloïde chronique :MYELEMIE, BASOPHILIEFORMULE AUTOMATE à contrôler : problème des basophiles et précurseurs éosinophiles15
Nouveau-né,enfantcellules immatures circulantesCellules souches circulantesLymphocytes à chromatine jeuneMicromégacaryocyte,noyaux nus de méga.Images: Dr O.Fenneteau
LYMPHOCYTES: granulations normales et anormalesGrands lymphocytes à grains (LGL) normauxLymphocytes vacuolés de Gasser: mucopolysaccharidoseAnomalies des grains: maladie de Chédiak-HigashiImages: Dr O.Fenneteau
LYMPHOCYTES: encoches nucléairesLymphome à cellules du manteauCoqueluche, lymphocytes clivésCellule de SézaryLymphome folliculaire
MACRO- et MICRO- THROMBOPENIES VRAIES*Macro- et microthrombopénies VRAIES, constitutionnelles:Thrombopénie surestimée en impédance, corrigée en optique ou MalassezMaladie de May-Hegglin (Sd MYH9)(plaquettes géantes, pseudo-corps de Döhle)Maladie de Bernard et Soulier(Macroplaquettes, deficit GpIb-IX)Syndrome de Wiskott-Aldrich(WASP, microplaquettes)IMPORTANCE DE L’ESTIMATION à l’œil du taux de plaquettes
Fausses thrombopénies et neutropénies à l’EDTAEXTREMEMENT FREQUENT: vérification obligatoire Agrégats plaquettaires (automate)Satellitisme plaquettaireSur le canal DIFFSur le canal IMI (myélémie)(formule leucocytaire)Réseau de fibrine, agrégats, satellitisme plaquettairesAgrégats de polynucléaires
Agglutinines froides Agrègent les GR entre eux:– Augmentation du VGM, de la CCMH– Diminution du nombre de GR et de l’Hte– Pas d’impact sur l’Hb Conduite à tenir :– Placer le prélèvement à 37 pendant une à deux heures et le repasserimmédiatement– Si pas de correction : recalculer l’Hb à partir de la CHCM mesurée remplacement iso-volumétrique du plasma en dernier recours, nouveau prélèvement maintenu à 37 (y comprisle matériel – et même le patient!! avant de prélever) AU PIRE: ne rendre que l’Hb , suppression de tous les autresparamètres ou encore: Hématocrite centrifugé /- calcul CCMH(Hb/Ht)
Cryoglobulines Les cryoglobulines précipitent en amas:– taille réduite : fausse augmentation du taux de plaquettes– grande taille : perturbation de la numération des leucocytes Exemple d’un cas avec graphe impédance faussement normal alorsque le graphe optique, perturbé, est plus fiable :
CONDUITE A TENIR TECHNIQUE DEVANTUNE ANEMIE NORMO / MACROCYTAIREVérifier le prélèvement Réticulocytes 100 G/L tendance REGENERATIVE Hémolyse/hémorragie URGENCE Regarder les globules rouges Paludisme?Schizocytes?Drépanocytes?Sphérocytes, elliptocytes? Etc 80 G/L tendance AREGENERATIVERegarder les globules blancs Cellules anormales circulantes?Anomalies morphologiques des PN?23
Anémies régénératives (Réticulocytes 120 T/L): 4 urgences diagnostiquesCrise drépanocytaire hmz S/S, double htz S/C (cibles)Sans thrombopénieHémighosts: déficit en G6PDPlasmodium falciparumAvec thrombopénie Schizocytes: MAT (PTT)24
Autres anémies régénératives constitutionnelles et acquisesAcanthocytoseEchinocytesElliptocytose3 causes de CCMH 37 g/dL VRAIEStomatocytose (formedéshydratée)Sphérocytose (pertesmembranaires)Hémoglobinose C(cristaux)25
Anémie arégénérative, /- pancytopénie: principales causes à envisagerNe pas commencer l’examen du frottis sans avoir l’ensemble de ces éléments à l’esprit1 ENVAHISSEMENT MEDULLAIRE Leucémie aiguë Leucémie à tricholeucocytes Métastase2 APOPTOSE INTRA-MEDULLAIRE Carences folates/B12 Myélodysplasie3 MOELLE PAUVRE Myélofibrose primitive4 HEMODILUTION: hypersplénisme ou prélèvement dans la perfusion!!26
Les anémies microcytairesHb VGM Réticulocytes non (le plus souvent)Carenceen ferAnémieinflammatoireNbre GR Nbre GR ThalassémieNbre GR /- régénératives27
Thalassémies: nbre de GR, anomalies morphologiques des GR variables12Délétion de 1 ou 2 gènes amicrocytose et hypochromie variablesHémoglobinose H (1,2)
PLACE DES LECTEURS DE LAMESAUTOMATISESCellaVision DM96 : automate avec tiroirs dechargement et déchargement de lames etécran de visualisation/validationDistributeur: SYSMEXEasy Cell Assistant : automate avec carrouselde chargement et écran devisualisation/validation.Distributeur: HORIBA
DM1200/DM96/DI60Cella Vision PraticabilitéCadenceReconnaissancedes leucocytesChargeur 12 lames déjà coloréesVersion DI60 connectable sur chaineEasy Cell Assistant Chargeur 30 lames déjà coloréesnon connectable1 position lame urgenteEnv. 30 lames à l’heure, selon le nombre de leucocytes à acquérir (au choix)1: Pré-classification par le logiciel2: reclassification par le technicien obligatoire3-ajout de commentaires, validation de la formule4- décision d’envoyer au LIS ou de recontrôler au microscope classiquePublicationsEnv. 95% d’éléments bien classésAprès reclassement: concordance avecMicroscopie classique: 98%Biais leucocytesLiés à la zone de lecture, plus proximale (tassée) qu’en optiqueglobules rougesGains qualitatifs:Aucune1 SEUL champ large au faible grossissementNbre de GR connu (ex: 1450)- possibilité de compter schizocytesINADAPTE pour: agrégats plaquettaires (sensiblité 40%), agglutinats GR, .Archivage des frottis, traçabilité, banque de données, habilitations, , enseignementtélémédecine, travail en multisite, temps si opérateur aguerri
DOSSIER N 1Nuage lympho: RASNuage PNN: petitNuage mono: anormal
CLASSIFICATION(1er écran): PNN, Pnéo, Ly,Mono, myélocytes métamyélocyte
ZOOM: PNN PNéo LGL Petits lymphocytes
CLASSIFICATION(2ème écran): Mono, myélocytes métamyélocyte, blastes, érythroblastes,plaquettes géantes, « cellules à corbeille », artéfacts
ZOOM: BLASTES MONOCYTES MYELOCYTES
ZOOM: érythroblaste, thrombocyte géant, cellules à corbeille
FORMULE ET INSERTION DE COMMENTAIRES
DOSSIER N 2NUAGES: répartition normaleMONO: 52%
PRECLASSIFICATION PAR LE LOGICIEL (1er écran): 2 cellules à reclasser (en haut)
PRECLASSIFICATION PAR LE LOGICIEL (2ème écran): 16 cellules à reclasser (en bas)
ZOOM: 16 cellules à reclasser , cellules à corbeille
Formule automate: mono 50%Formule microscopique: mono 50%Formule lecteur automatisé: 39%SOUS-ESTIMATION HABITUELLE DES MONOCYTESEn raison de leur répartition distale sur le frottis
Table de Rümke :Variation des valeurs relatives d'une population leucocytaire selon lenombre de cellules comptéesLES 3 FORMULES AUTOMATE/NUMERIQUE/CLASSIQUE SONT STATISTIQUEMENT EQUIVALENTES
LYMPHOCYTOSE POLYMORPHEPrésentation en premier lieu des éléments les plus discutables
DIAGNOSTIC DE LLC d’un seul COUP d’OEILPrésentation en premier lieu des ombres de Gumprecht,Cependant: mottes chromatiniennes peu visibles: contrôle en optique souhaitable
DIAGNOSTIC DE SYNDROME MONONUCLEOSIQUE D’UN COUP D’ŒILPrésentation en premier lieu des éléments les plus discutables
Lymphomes à cellules du manteau: noyaux encochés, chromatine jeune parfois nucléoléemicroscopie classique conseillée (éliminer formellement des blastes)
MYELODYSPLASIE: coexistence d’éléments normaux et dePNN pseudo-PELGER HUET et dégranulés
CONTRÔLE DE LA MYELEMIE EFFECTUE EN UN CLIN D’ŒIL!
BLASTES: chromatines fines et nucléolée
NOMBRE DE GR DANS LE CHAMP LARGE: n 1254DECOMPTE DES SCHIZOCYTES DANS CHACUN DES 9 CHAMPS
DETECTION FORTUITE D’HEMATIES PARASITEESINADAPTE à la recherche de paludisme, au décompte de parasitémie
QUE RETENIR DES LECTEURS AUTOMATISES? Technologie Innovante dans un secteur où on ne s’y attendait pas! Adaptation de l’œil nécessaire (texture chromatinienne) Acquisition rapide de population cellulaires pré-triées: revue rapide pour: Myélémie Lymphocytes normaux/anormaux Blastes, etc Automatisable (chaîne) Revue par un technicien habilité en cytologie INDISPENSABLE DANS TOUS LES CAS Temps: gain de temps possible en cas de leucopénie (et pour les cas ci-dessus) Archivage des cas, formation continue, habilitation Partage de données, discussion collégiale, travail en multisites. Adaptés pour la plupart des situations Inadaptés pour: Recherche de cellules rares, de parasites Agrégats plaquettaires Biais de décompte possibles (zone de lecture), en général en accord avec règles de Rümke
BIBLIOGRAPHIE1.Briggs C, Longair I, Slavik M, Thwaite K, Mills R, Thavaraja V, et al. Can automated blood film analysis replacethe manual differential ? An evaluation of the CellaVision DM96 automated image analysis system. 2007;1–13.2.Surcouf F, Delaune D, Samson T F V. Automated cell recognition in hematology: CellaVision DM96 TMsystem. Ann Biol Clin. 2009;67(4):419–24.3.Cornet E, Perol J, Troussard X. Performance evaluation and relevance of the CellaVision TM DM96 system inroutine analysis and in patients with malignant hematological diseases. 2007;1–7.4.Horn CL, Mansoor a, Wood B, Nelson H, Higa D, Lee LH, et al. Performance of the CellaVision((R)) DM96system for detecting red blood cell morphologic abnormalities. J Pathol Inf [Internet]. 2015;6:11. Available Kratz A1, Bengtsson HI, Casey JE, Keefe JM, Beatrice GH, Grzybek DY, Lewandrowski KB VCE. Performanceevaluation of the CellaVision DM96 system: WBC differentials by automated digital image analysis supported by anartificial neural network. Am J Clin Pathol. 124(5):770–81.6.Van Cott EM, Lewandrowski KB, Patel S, Grzybek DY, Patel HS, Fletcher SR, et al. Comparison of glass K3EDTAversus plastic K2EDTA blood-drawing tubes for complete blood counts, reticulocyte counts, and white blood celldifferentials. Lab Hematol [Internet]. 2003;9(1):10–4. Available from: sen EK, Urdal P, Hagve T, Holthe MR, Henriksson CE. Absolute Neutrophil Counts From AutomatedHematology Instruments Are Accurate and Precise Even at Very Low Levels. 2012;862–9.8.Racsa LD, Gander RM, Southern PM, Tekippe M, Doern C, Luu S. Detection of Intracellular Parasites by Useof the CellaVision DM96 Analyzer during Routine Screening of Peripheral Blood Smears. 2015;53(1):167–71.9.Gulati G, Uppal G, Florea AD, Gong J. Detection of Platelet Clumps on Peripheral Blood Smears by CellaVisionDM96 System and Microscopic Review. 2014;45(4):368–71.LECTURE CONSEILLEERevue HORIZON HEMATOLOGIE, rubrique Biologie, mars 2017 (à paraître)
MERCI DEVOTREATTENTION
Les technologies diffèrent, mais l'impédance est la base du comptage cellulaire et de la mesure des volumes Sysmex XE 2100 Mesure par impédance Mesure des GR et de l'Hte Calcul du VGM (Hte/nb de GR) Calcul de la CCMH (Hb/Hte) Comptage des érythroblastes Advia 120 (Siemens) Cytométrie en flux après sphérisation
Cours de Cytologie urinaire, Lyon, Juin 2016 (E Piaton et MCS) Assises de Pathologie Tours 26-27 mai 2016 19ème Congrès International de Cytologie, Yokohama, . Résultat congrès 2013 Remboursement Intérêts livret A TOTAL RECETTES.
Il est composé des secteurs de macroscopie, d'histologie, de cytologie, d'immunohistochimie, de recherche expérimentale, et d'une cellule qualité. Au laboratoire, différents types de prélèvements sont manipulés, à savoir : Les pièces d'exérèse ; Les biopsies, Les prélèvements d'autopsie ; Les prélèvements de cytologie (cytoponction de ponction d'organe ou de masse .
MAKALAH SEMINAR TUGAS AKHIR APLIKASI PENJAWAB PESAN SINGKAT AUTOMATIS DENGAN BAHASA PYTHON Halim Kurniawan*, Budi Setiyono**, R. Rizal Isnanto** . yang dibuat dan dibahas dalam tugas akhir ini adalah sebagai berikut : 1. Perancangan aplikasi Penjawab Pesan Singkat Automatis. Perancangan aplikasi menggunakan bahasa pemrograman Python versi 2.3 .
Cytologie et histologie Sommaire 1 Introduction 2 La cellule (cytologie science des cellules) 2.1 La plus petite unité structurelle et fonctionnelle du vivant 2.2 Structure et fonction de la cellule 2.2.1 Le cytoplasme 2.2.1.1 Le reticulum endoplasmique 2.2.1.2 Les ribosomes 2.2.1.3 L'appareil de Golgi 2.2.1.4 Les centrosomes 2.2.1.5 Les .
instrument offre de nombreuses capacit s de mesure de pression. . plusieurs dispositifs tester (DUT) t Incertitude de la mesure de pression de 0.02!% de la PE . la mise en ligne de syst mes automatis s. Le 2271A pr sente galement une interface compl te distance qui vous
Dispositifs de protection optoélectroniques PSENopt et PSENopt SB . toutes les tâches d’automatis-mes. Y compris pour les tâches de commande standard. Les . sur mesure issues d’un seul et même fournisseur. Pilz est une entreprise familiale avec une grande
2. enregistrement de la réponse du sujet par boîtier à boutons ou par le clavier de l’ordinateur. 3. mesure du temps de réponse avec une précision de l’ordre de la milliseconde. 4. grande flexibilité dans la conception des expériences. 5. logiciel ergonomique, facile à utiliser. 6. compatibilité avec la station de test à 8 postes. 7.
Dispositifs de protection optoélectroniques . toutes les tâches d’automatis-mes. Y compris pour les tâches de commande standard. Les . qu’il s’agisse de fonctions de commande de sécurité ou stan-dard – de machines ou d’ins-tallations – d’une architecture
