Method Validation Method Verification For Chemical Analytical Methods
Method validationMethod verificationforChemical analytical ยาศาสตร์การแพทย์ ประจาปีงบประมาณ พ.ศ. 2562กนกพร อธิสขุ10 มกราคม 25621
Topics for today Definition “Verification” vs “Validation”(Ref: ISO/IEC Guide 99: 2007) ISO/IEC 17025: 2017 Requirements 7.2 Performance characteristics of validated methods2
ISO/IEC 17025: 2017Terms and definitions3.8 verificationProvision of objective evidence that a given items fulfilsspecified requirementsการทวนสอบ - �าหลักฐานเพือ่ ให้มัน่ ใจวาเป็่ นไปตามขอก้ าหนด3.9 validationVerification, where the specified requirements are adequatefor intended �ด้ ��ง)– �า้หลักฐานเพือ่ ให้มัน่ ใจวาเป็่ นไปตามขอก้ ��ะสงคการใช์้งาน3
What is the difference between validationand verification?Method validation is usually considered to be veryclosely tied to method development.MV มักจะพ่ วงกันกับ การพัฒนาวิธีMany of method performancecharacteristics that are associated withmethod validation are usually evaluated,as part of method �ิธีบางอย่ างใน MVเป็ นส่ �าวิธี4
What is the difference between validationand verification?A laboratory may adopt a validated procedure which,e.g. has been published as a standard, or buy acomplete measuring system to be used for a specificapplication from a commercial manufacturer.In both cases, basic validation work hasalready been carried out but the lab willstill need to confirm its ability to applythe method.This is “Method verification”.5
ISO/IEC 17025: 20055.4 Test and calibration methods andmethod validation5.4.2 Selection of methods5.4.3 Laboratory-developed methods5.4.4 Non-standard methods5.4.5 Validation of methods6
ISO/IEC 17025: 20177 Process requirements7.2 Selection, verification and validation ofmethods7.2.1 Selection and verification of methods7.2.2 Validation of methods7
ISO/IEC 17025: 20177.2.1.1 Lab shall use appropriate methods and procedures for alllab activities and for evaluation of MU as well as statisticaltechniques for analysis data.Lab ตองใช้้ methods and procedures ทีเ่ �ม รวมทัง้ �แน่่ ่ นอน และการวิเคราะหข้ �ถิต ิ์ อมู7.2.1.2 All methods, procedures and supporting documentationshall be kept up-to-date and made readily available topersonnel.Methods, procedures และเอกสารสนับสนุ นทัง้ หมด ตอง้เป็ นปัจจุบนั �กรใช้งาน้8
ISO/IEC 17025: 20177.2.1.3 Lab shall ensure that it uses the latest validversion of a method unless it is not appropriate orpossible to do so.When necessary, the application of a method shall besupplemented with additional details to ensureconsistent applicationLab ตองมัน่ ใจวาใช้่้ latest valid version of a methodถาจ่ รี ายละเอียดเพิม่ เติม้ าเป็ น Lab ต้องจัดทาเอกสาร (SOP) ทีม9
ISO/IEC 17025: 20177.2.1.4 When the customer does not specify the method tobe use, lab shall select an appropriate method andinform the customer of the method chosen.Methods published either in international, regional ornational standards, or by reputable technicalorganizations, or in relevant scientific texts or journals, oras specified by the manufacturer of the equipment, arerecommended.10
ISO/IEC 17025: 2017Standard ตีพมิ พ์ โดย องค์ กรนานาชาติ องค์ กรระดับภูมภิ าค องค์ กรระดับชาติหรื อ องค์ กรที่มีช่ ือเสียง หรื อตาราวิทยาศาสตร์ � หรื อวิธีท่ �ครื่องมือLab-developed or modified methods can also be used.ห้องปฏิบตั กิ ารสามารถใช้วิธที หี่ ้องปฏิบตั กิ ารพัฒนาขึน้ เองได้11
ISO/IEC 17025: 2017Verification of methods กรณีใช้ วิธีมาตรฐาน7.2.1.5 Lab shall verify that it can properly perform methodsbefore introducing them by ensuring that it can be achievethe required performance.กรณีใช้วิธมี าตรฐาน ตองทวนสอบวิธี้Records of the verification shall be �ึกขอมู้้ ลการทวนสอบวิธ ีIf the method is revised by the issuing body, verification shallbe repeated to the extent necessary.ถาวิี าตรฐานมีการ revise ตองทวนสอบซา้้ ธม้12
ISO/IEC 17025: 2017Validation of methods กรณีไม่ ได้ ใช้ วิธีมาตรฐาน7.2.2.1 Lab shall validate non-standard methods, labdeveloped methods and standard methods used outsidetheir intended scope or otherwise modified.Non-standard methods:วิธที พี่ ฒั นาขึน้ เอง วิธมี าตรฐานทีด่ ดั �ขาย่The validation shall be as extensive as is necessary to meetthe needs the given application or field of �� าเป็ นเพือ่ ตอบสนอง้ องเข้้ น/เพี้่ �ช้้วิธ ี13
ISO/IEC 17025: 2017Validation of methods7.2.2.2 When changes are made to a validated method, theinfluence of such changes shall be determinedand where they are found to affect the original validation, anew method validation shall be performed. Revalidation7.2.2.3 The performance characteristics of validatedmethods, as assessed for the intended use,shall be relevant to the customers’ needand consistent with specified requirements.14
ISO/IEC 17025: 2017Validation of methods7.2.2.4 The lab shall retain the following records ofvalidation:a) the validation procedure used;b) specification of the requirements;c) determination of the performance characteristics ofthe method;d) results obtained;e) a statement on the validity of the method, detailingits fitness for the intended use.15
Assumptionswhen performing Validation The equipment on which the work is beingdone isbroadly suited to the application. It is clean, wellmaintainedand within calibration. The staff carrying out the validation arecompetent in thetype of work involved. There are no unusual fluctuations in laboratory16
How do you validate a method? Explore the intended use of the methodDecide on performance characteristicsPlan a suite of experimentsCarry out experimentsUse data to assess fitness for the intended useProduce a statement of validation– Scope of the method- a statement on the validity of the method17
Fitness for purposeWhat is the purpose of method used? เพื่อใช้ �ปลอดภัยตามเกณฑ์ ท่ กี ฎหมายกาหนด เพื่อใช้ �ามเกณฑ์ ท่ กี าหนด เพื่อใช้ วัตถุประสงค์ อ่ นื ๆ เช่ น งานวิจัย18
When should methods be validated? Non-standard methods; Laboratory designed/developed methods Standard methods used outside theirintended scope; Amplifications and modifications of standardmethods19
How should methods be validated? Interlaboratory approach‘collaborative studies’ Single-laboratory approach Extent of validation studies‘Validation is always a balance between costs,risks and technical possibilities’20
Performance CharacteristicsEurachem Guide MV 2014 (p 14)21
Validation plan and report Validation protocol- Scope of method; analyte, unit, types of sample(matrix), intended use- Description of method- Performance characteristics- Acceptable requirements22
Representative samplesPesticide residuesPlant products (Codex)Common propertiesCommodity groupRepresentative speciesHigh water and chlorophyllcontentLeafy vegetablesBrassica leafy vegetablesLegume vegetablesSpinach or lettuceBroccoli, cabbage, kaleGreen beanHigh water and low or nochlorophyll contentPome fruitsStone fruitsBerriesSmall fruitsFruiting vegetablesApple, pearPeach, cherryStrawberryGrapeTomato, bell pepper,melon, mushroomPotato, carrot, parsleyRoot vegetables23
Representative samplesPesticide residuesCommon propertiesCommodity groupRepresentative speciesHigh acid contentCitrus fruitsOrange, lemonHigh sugar contentRaisins, datesHigh oil and fatOil seedsNutsAvocado, sunflower seed,walnut, pecan nut,pistachiosDry materialsCerealWheat, rice or maize grainsWheat bran, wheat flourCommodities requiringindividual teste.g. garlic, hops, tea,spices, cranberry24
Representative samplesPesticide residuesPlant products (EC SANTE/11945/2015)Commodity group1. High water content2. High acid content and high water content3. High sugar and low water content4a. High oil and very low water content4b. High oil and intermediate water content5. High starch and/or protein content and low water and fat content6. Difficult or unique commodities25
Representative samplesFoodsCosmeticsBiological products26
Validation plan and report Validation report (ISO/IEC 17025 #7.2.2.4)- Results- a statement on the validity of the method,detailing its fitness for the intended use- When and who perform the work27
Validation tools1. Blanks- Reagent blanks- Sample blanks2. Routine test samples3. Spiked materials/solutions4. Incurred materials5. Measurement standards; RM & CRM28
Validation tools6. Statistics- Arithmetic mean ค่ าเฉลีย่ เลขคณิต- Variance ค่ าแปรปรวน- Standard deviation ค่ �- Standard error or Standard deviation of themeanค่ าคลาดเคลือ่ �ีย่- Coefficient of variation สั มประสิ ทธิ์ความแปรปรวน- การทดสอบค่ าสุ ดต่ าง (outlier) ด้ วย Grubb’s test- การทดสอบค่ าแปรปรวนสุ ดต่ าง ด้ วย Cochran’s test29
Selectivity Selectivity (or �ะจง คือคุณสมบัตทิ บี่ อกว่ าวิธีน้ันจะไม่ ตอบสนองต่ อสารอืน่ ทีไ่ ม่ ใช่ � �รำะห์ ที่ใช้เครื่ องมือวัด chromatograph หรื อspectrophotometer หรื อ spectrometerวิเครำะห์ matrix blank หรื อ �ัญญำน (หรื อ พบแต่นอ้ ยมำก) เมื่อเปรี ยบเทียบกับ �ำน �จำเพำะเจำะจง ไม่มีกำรรบกวนจำก30
Limit of DetectionLOD �จพบ คือความเข้ มข้ นทีต่ า่ ทีส่ ุ ดของ analyte ในตัวอย่างทีว่ �ด้ �มั่น 99%LOD 3s หรื อ x 3s31
Limit of QuantitationLOQ �เชิงปริมาณ คือความเข้ มข้ นทีต่ า่ ทีส่ ุ ดของ analyte ในตัวอย่างทีว่ �ด้โดยมีความแม่ น (accuracy) และความเทีย่ ง (precision) ในระดับทีย่ อมรับได้LOQ 10s หรื อ x 10s32
Method working rangeช่ วงการใช้ งาน หรือ ช่ วงการวัด คือคุณสมบัตขิ องวิธีทแี่ สดงช่ วงความเข้ มข้ �ใช้ ได้ และแสดงความสั มพันธ์ อย่างเป็ นสั ดส่ วนโดยตรง (เป็ นเส้ นตรง) ระหว่ างสั ญญาน �วัดและความเข้ มข้ นของสารWorking rangeMeasured concLOQConc in sample33
Accuracyความแม่ น คือคุณสมบัตทิ แี่ สดงความใกล้ (closeness) ของค่ าที่วธิ � กบัค่ าอ้างอิงค่ าอ้างอิง อาจ เป็ น ค่ าอ้างอิงรับรอง (certified value) โดยใช้ CRMหรือ ค่ าทีร่ ้ ู แล้ ว (known value) โดยใช้ spiked sample34
Recovery studyเกณฑ์ ยอมรั บ mean % Recovery (AOAC)ความเข้ มข้ น% Recovery100%98-102 10%98-102 1%97-103 0.1%95-105100 mg/kg90-10710 mg/kg80-1101 mg/kg80-100100 ug/kg80-11010 ug/kg60-1151 ug/kg40-12035
Recovery studyเกณฑ์ ยอมรั บ mean % Recovery (Codex- Trace organic analysis)ความเข้ มข้ น% Recovery 1 g/kg50-120 1 g/kg 0.01 mg/kg60-120 0.01 mg/kg 0.1 mg/kg70-120 0.1 mg/kg 1 mg/kg70-110 1 mg/kg70-11036
Precisionความเที่ยง คือคุณสมบัตทิ แี่ � าทีว่ �ด้ จากการวิเคราะห์ ซ้า (replication)Repeatability, expected to give the smallestvariation in results, is a measurement isperformed by a single analyst using sameequipment over short timescale.Reproducibility, expected to give the largestvariation in results, is a measure of thevariability in results between laboratories.Intermediate precision – variation in results whenmeasurements are made in a single laboratory but underconditions that are more than repeatability conditions.37
%RSDR &%RSDr(Horwitz’s equation)concentrationC (dimensionless)%RSDR%RSDr100% (100g/100g)121.310% (10g/100g)0.12.81.91% (1g/100g)0.014 ( 22 )2.70.1% (0.1g/100g)0.0015.63.7100 mg/kg0.0001 (10 -4)8 ( 23 )5.410 mg/kg0.00001 (10 -5)117.41 mg/kg0.000001 (10 -6)16 ( 24 )10.70.1 mg/kg0.0000001 (10 -7)2315.40.01 mg/kg0.00000001 (10 -8)32 ( 25 )21.41 g/kg0.000000001 (10 -9)4530.10.1 g/kg0.0000000001 (10 -10)64 ( 26 )42.9กนกพร อธิสุขกรมวิ �38
Matrix EffectsThe matrix effect is defined as the combined effect of allcomponents of the sample other than the analyte.Matrix enhancement and suppression is frequently observed in modernanalytical routines, such as GC, HPLC, and ICP.ทดสอบเพือ่ ?ถ้ า matrix ไม่ มี effect ก็สามารถใช้ standard solution มาสร้ าง calibration curve ได้ถ้ า matrix มี effect ก็ไม่ สามารถใช้ standard solution มาสร้ าง calibration curve ได้ ต้ องใช้ standard ที่เตรียมใน matrix extract39
Matrix EffectsPeak areaNo matrixeffectStandard solutionPeak areaconcentrationStandard in matrix extractmatrix effect isobservedสร้ าง standard curve อย่ างน้ อย 6 ความเข้มข้น2 ชุด- ชุดที่ 1 standard solution- ชุดที่ 2 standard in matrix extractconcentration40
การทดสอบ Matrix Effectsคานวณได้ หลายแบบ เช่ นMatrix effect is quantitated by the use of the following formula:ME% 100 * A(extract)/A(standard)where A(extract) is the peak area of analyte, when diluted with matrix extract. A(standard) is thepeak area of analyte in the absence of matrix. The concentration of analyte in both standardsshould be the same. Matrix effect close to 100 indicate absence of matrix influence. Matrix effectvalue of less than 100 indicates suppression, while larger than 100 is a sign of matrix enhancement.Alternative definition of Matrix Effect utilizes the formula:ME% 100 * A(extract)/A(standard) - 100The advantages of this definition are that negative values indicates suppression, while positivevalues are a sign of matrix enhancement. Ideally, value of 0 is related to the absence of matrixeffect.41
การทดสอบ Matrix Effectsคานวณได้ หลายแบบ เช่ นTest for Significance of matrix effect with paired t-test:tcalc 𝒅 𝒏𝑺𝑫where 𝒅 is the average and SD is the standard deviation of differences (di)SD (𝒅𝒊 𝒅)𝒏 𝟏Where n is the number of data pairstcalc tcritNon-significant difference or No matrix effect42
RuggednessRuggedness (robustness) of an analytical procedure is“a measure of its capacity to remain unaffected by small,but deliberate variations in method parameters”Therefore a ruggedness study is in most cases notnecessary at the single-laboratory level.Information about ruggedness should be indicated in thelaboratory procedure in the form of stated tolerance limitsof the critical experimental parameters.43
RuggednessRuggedness (robustness) of an analytical procedure is“a measure of its capacity to remain unaffected by small,but deliberate variations in method parameters”Therefore a ruggedness study is in most cases notnecessary at the single-laboratory level.Information about ruggedness should be indicated in thelaboratory procedure in the form of stated tolerance limitsof the critical experimental parameters.44
Measurement uncertaintyMU is not a performance characteristic of a particularmeasurement process but a property of the resultsobtained using measurement procedure.45
Method verification* Selectivity* LOD/LOQ* Working range* Accuracy* Precision* MU46
7.2 Selection, verification and validation of methods 7.2.1 Selection and verification of methods 7.2.2 Validation of methods 7 7 Process requirements . . individual test e.g. garlic, hops, tea, spices, cranberry 24. Representative samples Pesticide residues Commodity group 1. High water content
Bruksanvisning för bilstereo . Bruksanvisning for bilstereo . Instrukcja obsługi samochodowego odtwarzacza stereo . Operating Instructions for Car Stereo . 610-104 . SV . Bruksanvisning i original
new approaches for verification and validation. 1.1. Role of Verification and Validation Verification tests are aimed at "'building the system right," and validation tests are aimed at "building the right system." Thus, verification examines issues such as ensuring that the knowledge in the system is rep-
10 tips och tricks för att lyckas med ert sap-projekt 20 SAPSANYTT 2/2015 De flesta projektledare känner säkert till Cobb’s paradox. Martin Cobb verkade som CIO för sekretariatet för Treasury Board of Canada 1995 då han ställde frågan
service i Norge och Finland drivs inom ramen för ett enskilt företag (NRK. 1 och Yleisradio), fin ns det i Sverige tre: Ett för tv (Sveriges Television , SVT ), ett för radio (Sveriges Radio , SR ) och ett för utbildnings program (Sveriges Utbildningsradio, UR, vilket till följd av sin begränsade storlek inte återfinns bland de 25 största
Hotell För hotell anges de tre klasserna A/B, C och D. Det betyder att den "normala" standarden C är acceptabel men att motiven för en högre standard är starka. Ljudklass C motsvarar de tidigare normkraven för hotell, ljudklass A/B motsvarar kraven för moderna hotell med hög standard och ljudklass D kan användas vid
LÄS NOGGRANT FÖLJANDE VILLKOR FÖR APPLE DEVELOPER PROGRAM LICENCE . Apple Developer Program License Agreement Syfte Du vill använda Apple-mjukvara (enligt definitionen nedan) för att utveckla en eller flera Applikationer (enligt definitionen nedan) för Apple-märkta produkter. . Applikationer som utvecklas för iOS-produkter, Apple .
Validation of standardized methods (ISO 17468) described the rules for validation or re-validation of standardized (ISO or CEN) methods. Based on principles described in ISO 16140-2. -Single lab validation . describes the validation against a reference method or without a reference method using a classical approach or a factorial design approach.
associated with method validation and method verification, and to present the verification results applicable to this study. 4.1 Method validation Methods and procedures that are used to assess the quality of pharmaceuticals must meet certain standards of accuracy and reliability (USP, 2013). The validation of a method entails the
