La Mutación
LA MUTACIÓNB. McClintockMaízBoca de dragónH. J. MullerTerminología.Mutación somática y mutación en la línea germinal.Niveles mutacionales.Mutación espontánea e inducida.Clasificación de las mutaciones génicas.Tipos de mutaciones génicas.Mutaciones espontáneas.Errores en la replicación.Daños fortuitos en el ADN.Elementos genéticos transponibles.Mutaciones espontáneas y enfermedades humanas.Mutagénesis inducida.Especifcidad mutacional.Mecanismos de mutagénesis.Reparación de los daños en el ADNSistemas que evitan los errores antes de que ocurran.Reparación directa de las lesiones en el ADN.Sistemas de reparación por escisión.Reparación posterior a la replicación.Reversión.Carácter preadaptativo de la mutación.Prueba de fluctuación.Placa replicada.Frecuencia y tasa de mutación.TERMINOLOGÍALa definición que dio De Vries (1901) de la mutación era la de cualquier cambio heredable en elmaterial hereditario que no se puede explicar mediante segregación o recombinación.La definición de mutación a partir del conocimiento de que el material hereditario es el ADN yde la propuesta de la Doble Hélice para explicar la estructura del material hereditario (Watson yCrick,1953), sería que una mutación es cualquier cambio en la secuencia de nucleótidos delADN.La mutación es la fuente primaria de variabilidad genética en las poblaciones, mientras que larecombinación al crear nuevas combinaciones a partir de las generadas por la mutación, es lafuente secundaria de variabilidad genética.
MUTACIÓN SOMÁTICA Y MUTACIÓN EN LA LÍNEA GERMINALMutación somática: afecta a las células somáticas del individuo. Como consecuenciaaparecen individuos mosaico que poseen dos líneas celulares diferentes con distinto genotipo.Una vez que una célula sufre una mutación, todas las células que derivan de ella por divisionesmitóticas heredarán la mutación (herencia celular). Un individuo mosaico originado por unamutación somática posee un grupo de células con un genotipo diferente al resto, cuanto antesse haya dado la mutación en el desarrollo del individuo mayor será la proporción de células condistinto genotipo. En el supuesto de que la mutación se hubiera dado después de la primeradivisión del cigoto (en estado de dos células), la mitad de las células del individuo adultotendrían un genotipo y la otra mitad otro distinto. Las mutaciones que afectan solamente a lascélulas de la línea somática no se transmiten a la siguiente generación.Mutaciones en la línea germinal: afectan a las células productoras de gametos apareciendogametos con mutaciones. Estas mutaciones se transmiten a la siguiente generación y tienen unmayor importancia desde el punto de vista evolutivo.NIVELES MUTACIONALESEs una clasificación de las mutaciones basada en la cantidad de material hereditario afectadopor la mutación:Mutación génica: mutación que afecta a un solo gen.Mutación: cromosómica: mutación que afecta a un segmento cromosómico que incluye variosgenes.Mutación genómica: mutación que afecta a cromosomas completos (por exceso o por defecto)o a juegos cromosómicos completos.MUTACIÓN ESPONTÁNEA E INDUCIDAMutación espontánea: se produce de forma natural o normal en los individuos.Mutación inducida: se produce como consecuencia de la exposición a agentes mutagénicosquímicos o físicos.MUTACIONES GÉNICASSustituciones de bases: cambio o sustitución de una base por otra en el ADN.Transiciones: cambio de una purina (Pu) por otra purina, o bien cambio de una pirimidina(Pi) por otra pirimida.Transversiones: cambio de una purina (Pu) por una pirimidina (Pi) o cambio de una
pirimidina (Pi) por una purina (Pu).Inserciones o adiciones y deleciones de nucleótidos: se trata de ganancias de uno o másnucleótidos (inserciones o adiciones) y de pérdidas de uno o más nucleótidos (deleciones).Tienen como consecuencia cambios en el cuadro o pauta de lectura cuando el número denucleótidos ganado o perdido no es múltiplos de tres.Duplicaciones: consiste en la repetición de un segmento de ADN del interior de un gen.Inversiones: un segmento de ADN del interior de un gen se invierte, para ello es necesario quese produzcan dos giros de 180º , uno para invertir la secuencia y otro para mantener lapolaridad del ADN.Transposiciones: un segmento de un gen cambia de posición para estar en otro lugar distintodel mismo gen o en otro lugar del genoma.TIPOS DE MUTACIONES GÉNICASEn la siguiente tabla se resumen algunos tipos de mutaciones génicas en el ADN y en susconsecuencias en las proteínas.Tipos de mutaciones génicasEn el ADNTransicionesResultados y ejemplosEn el ADNPu Pu o Pi Pi: AT GC, GC AT, CG TA y TA CGPu Pi o Pi Pu: AT CG, AT TA, GC TA, GC CG,TransversionesTA GC, TA AT, CG AT y CG GCEn la proteínaEn la proteínaTripletes que codifican para el mismo aminoácido:Mutación silenciosaAAG(arg) CGG(arg)Tripletes que codifican para aminoácidos equivalentesMutación neutradistintos. AAA(lys) AGA(arg). Ambos son aminoácidosbásicosAparece un nuevo triplete que codifica para un aminoácido deMutación cambio de sentidodistinto tipo. La proteína pierde su función.Aparece un triplete de terminación o FIN:Mutación sin sentidoCAG(gln) UAG(FIN)Mutación cambio de fase o pauta Adición o deleción de un único par de nucleótidos o de variosde lecturapares de nucleótidos, siempre que no sean múltiplo de tres.Es importante aclarar el concepto de mutación silenciosa, una mutación silenciosa es cualquieralteración en la secuencia de nucleótidos del ADN que no produce cambio en el fenotipoestudiado. Imaginemos que la característica externa o fenotipo analizado es simplemente lafunción de un enzima, es evidente que existen mutaciones en la secuencia de nucleótidos delADN que no producen cambios en la secuencia de aminoácidos, pero también hay mutacionesen el ADN que producen cambios en la secuencia de aminoácidos que no alteran la función delenzima analizado. Ambas tipos de mutaciones son silenciosas, ya que ninguna altera la funcióndel enzima.
MUTACIONES ESPONTÁNEASLas principales causas de las mutaciones que se producen de forma natural o normal en laspoblaciones son tres:Errores durante la replicación.Lesiones o daños fortuitos en el ADN.Los elementos genéticos transponibles.ERRORES EN LA REPLICACIÓNVamos a considerar tres tipos de errores durante la replicación del ADN:La tautomería: las bases nitorgenadas se encuentran habitualmente en su formacetónica y con menos frecuencia aparecen en su forma tautomérica enólica o imino. Lasformas tautoméricas o enólicas de las bases nitrogenadas (A*, T*, G* y C*) muestranrelaciones de apareamiento distintas: A*-C, T*-G, G*-T y C*-A. El cambio de la formanormal cetónica a la forma enólica produce transiciones. Los errores en el apareamientoincorrecto de las bases nitrogenadas pueden ser detectados por la función correctora depruebas de la ADN polimerasa III.Las mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura: se trata de inserciones odeleciones de uno o muy pocos nucleótidos. Según un modelo propuesto por Streisinger,estas mutaciones se producen con frecuencia en regiones con secuencias repetidas. Enlas regiones con secuencias repetidas, por ejemplo, AAAAAAAAAAA., o por ejemplo,ATATATATATATATAT., durante la replicación se puede producir el deslizamiento deuna de las dos hélices (la hélice molde o la de nueva síntesis) dando lugar a lo que sellama el "apareamiento erróneo deslizado". El deslizamiento de la hélice de nueva síntesisda lugar a una adición, mientras que el deslizamiento de la hélice molde origina unadeleción. En el gen lac I (gen estructural de la proteína represora) de E. coli se hanencontrado puntos calientes (regiones en las que la mutación es muy frecuente) quecoinciden con secuencias repetidas: un ejemplo es el punto caliente CTGG CTGG CTGG.Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de regionesrelativamente grandes también se han detectado con bastante frecuencia en regiones consecuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli se han detectado deleciones grandes quetienen lugar entre secuencias repetidas. Se cree que estas mutaciones podríanproducirse por un sistema semejante al propuesto por Streisinger ("Apareamiento erróneodeslizado") o bien por sobrecruzamiento desigual. Del sobrecruzamiento desigualhablaremos más adelante en el curso.TautomeríaLa tautomería originatransicionesPuntos calientes gen lacI
TautomeríaHipótesis de StreisingerDeleciones gen lacILESIONES O DAÑOS FORTUITOS EN EL ADNPueden darse tres tipos de daños fortuitos en el ADN:Despurinización: rotura del enlace glucosídico entre la base nitrogenada y el azúcar alque está unida con pérdida de una Adenina (A) o de una Guanina (G). Comoconsecuencia aparecen sedes Apurínicas. Existe un sistema de reparación de este tipo delesiones en el ADN. Este tipo de lesión es la más recurrente o frecuente: se estima que seproduce una pérdida de 10.000 cada 20 horas a 37ºC.Desaminación: consiste en la pérdida de grupos amino. La Citosina (C) pordesaminación se convierte en Uracilo (U) y el Uracilo empareja con Adenina (A)produciéndose transiciones: GC AT. El Uracilo (U) no forma parte del ADN, existiéndoun enzima llamada glucosidasa de uracilo encargada de detectar la presencia de U en elADN y retirarlo. Al retirar el Uracilo (U) se produce una sede apirimidínica. La 5-MetilCitosina (5-Me-C) por desaminación se convierte en Timina (T). La Timina (T) es una basenormal en el ADN y no se retira, por tanto estos errores no se reparan. Este tipo demutación también genera transiciones.Daños oxidativos en el ADN: El metabolismo aeróbico produce radicales superoxido O2,peróxido de hidrógeno H2O2 e hidroxilo. Estos radicales producen daños en el ADN, y unade las principales alteraciones que originan es la transformación de la Guanina (G) en 8oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que aparea con la Adenina (A). La 8-oxo-7,8-dihidrodesoxiguanina recibe el nombre abreviado de 8-oxo-G. Esta alteración del ADN producetransversiones: GC TA. La Timidina se convierte en Glicol de timidina.Desaminación de CitosinaDesaminación 5-MetilcitosinaDaños oxidativos en el ADN
ELEMENTOS GENÉTICOS TRANSPONIBLESLos elementos genéticos transponibles son secuencias de ADN que tienen la propiedad decambiar de posición dentro del genoma, por tal causa también reciben el nombre de elementosgenéticos móviles. Por tanto, cuando cambian de posición y abandonan el lugar en el queestaban, en ese sitio, se produce un deleción o pérdida de bases. Si el elemento transponibleestaba insertado en el interior de un gen, puede que se recupere la función de dicho gen. Deigual forma, si el elemento genético móvil al cambiar de posición se inserta dentro de un gen seproduce una adición de una gran cantidad de nucleótidos que tendrá como consecuencia lapérdida de la función de dicho gen. Por consiguiente, los elementos genéticos transponiblesproducen mutaciones.Su existencia fue propuesta por B. McClintock (1951 a 1957) en maíz, sin embargo, suexistencia no se demostró hasta mucho más tarde en bacterias. En el fenómeno de latransposición no se ha encontrado una relación clara entre la secuencia de la sede donadora(lugar en el que está el transposón) y la sede aceptora (lugar al que se incorpora eltransposón). Algunos transposones muestran una preferencia por una determinada región(zona de 2000 a 3000 pares de bases), pero dentro de ella parecen insertarse al azar.Transposones en bacterias.Tipos de transposones.Tipos de transposición.Transposones en eucariontes.En maíz.En boca de dragón, en petunia y en soja.En levaduras.En Drosophila melanogaster.En mamíferos.TRANSPOSONES EN BACTERIASLa existencia de transposones o elementos genéticos móviles se demostró en bacterias. Enbacterias existen dos tipos de elementos genéticos móviles:Tipos de transposones:Transposón Simple, Secuencia de Inserción o Elemento de Inserción (IS): lostransposones simples contienen una secuencia central con información para latransposasa y en los extremos una secuencia repetida en orden inverso. Esta secuenciarepetida en orden inverso no es necesariamente idéntica, aunque muy parecida. Cuandoun transposón simple se integra en luna determinado punto del ADN aparece unarepetición directa de la secuencia diana (5-12 pb).Transposón Compuesto (Tn): contienen un elemento de inserción (IS) en cada extremoen orden directo o inverso y una región central que además suele contener informaciiónde otro tipo. Por ejemplo, los Factores de transferencia de resistencia (RTF), poseeninformación en la zona central para resistencia a antibióticos (cloranfenicol, kanamicina,tetraciclina, etc.).
Transposón simple y transposón compuesto Puntos de integración de IS1, IS2, IS3 y Tn1000En la siguiente tabla se resumen las principales características de algunos elementos IS:Repetición terminal Repetición directa deinvertidala diana786 pb23 pb9 pb1327 pb41 pb5 pb1428 pb18 pb11-12 pb1195 pb16 pb4 pbElemento LongitudIS1IS2IS4IS5Selección de la dianaRegionalZona calienteAAAX20 .XTTTZona calienteEn la siguiente tabla se resumen las principales características de algunos Transposonescompuestos (Tn):Elemento LongitudTn 10Tn 5Tn 903Tn 99300 pb5700 pb3100 pb2500 pbMarcador cinaCloranfenicolISIS 10IS 5IS 903IS 9MÓDULOS TERMINALESOrientación Relación entre ambosInvertidaDivergencia 2,5%InvertidaDifieren en 1 pbInvertidaIdénticosDirectaIdénticos (?)Tanto los elemntos IS como los trasnposones compuestos (Tn) tienen que estar integrados enotra molécula de ADN, el cromosoma principal bacteriano o en un plasmidio, nunca seencuentran libres. En la gráfica anterior se pueden ver los puntos de integración de losElementos de Inserción IS1, IS2, IS3 y del Transposón compuesto Tn1000 en el cromosoma deE. coli.Tipos de transposición:En general se distinguen dos tipos o formas de transposición:Transposición conservativa: el transposón sale de la sede donadora que queda vacía yse incorpora en una nueva sede (sede receptora). No aumenta el número de copiasz deltransposón en el interior de la célula.Transposición replicativa: el transposón permanece en la sede donadora y mediante unmecanismo combinado de replicación y recombinación se incorpora en la sede aceptora.Aumenta el número de copias del transposón en el interior de la célula.
Mecanismo de transposiciónTransposición conservativa y replicativaTRANSPOSONES EN EUCARIONTESTransposones en maízLos transposones fueron descubiertos por B. McClintock (1951 a 1957) en maíz, sin embargo,cuando postuló su existencia la comunidad científica no comprendió adecuadamente sustrabajos. Años más tarde, ella misma comparó los "elementos controladores" que había descrito(elementos cromosómicos transponibles) de maíz con los transposones de los plasmidios. Sustrabajos recibieron el Premio Nobel en 1983.Dentro de las familias de elementos controladores de maíz hay que distinguir dos clases:Los elementos autónomos: capaces de escindirse de la sede donadora y transponerse.Los elementos No autónomos: son estables, y solamente se vuelven inestables enpresencia de los autónomos en posición trans.B. McClintockTransposones en maízEn el sistema Ac-Ds (Activador-Disociación) estudiado por B. McClintock, Ac es el elementoautónomo y Ds es el elemento No autónomo. Además del sistema Ac-Ds en maíz se handescrito otros sistemas como el Mu (Mutador), sistema Spm (Supresor-Mutador), sistema Rstippled y sistema MrRm. Algunas características de estos sistemas son las siguientes:Elemento LongitudAc4563 pbCuadros de lecturaabiertos3Repetición terminalinvertida11 pbRepetición directade la diana8 pb
MuSpm1367 pb8287 pb41213 pb13 pb8 pb3 pbTransposones en boca de dragón, petunia y soja:También se han encontrado transposones en otras especies de plantas:Boca de dragón (Anthirrhinum majus): familia de transposones Tam1 (1700 pb), Tam2 yTam3 (5000 pb).Petunia, soja (Glycine max), etc.Transposones en levaduras:Igualmente en levaduras también se han detectado transposones, por ejemplo, el sistema "flipflop" de control del tipo de apareamiento en Schizosaccharomyces pombe, el modelo en"casette" de Saccharomyces cerevisiae. También, se han dscrito los transposones de la familiaTy (6300 pb).Transposones en Drosophila melanogaster:En Drosophila melanogaster se han descrito varias familias de transposones, siendo las másimportantes los elementos "copia", elementos P y los elementos FB (foldback). Algunas de suscaracterísticas son las siguientes:ElementoCopiaFBPCopias por LongitudRepeticiónRepeticióngenoma(pb)terminal directa terminal inversa20-605000267 pb13 pb 30500-5000No250-1250 pb 50 ó 60 500-2000No31 pbRepetición directade la diana5 pb9 pb8 pbEn Drosophila melanogaster se ha descrito el fenómeno d la Disgénesis híbrida, uno de lossistemas responsables es el sistema P-M. En los cruzamientos P x M (machos Pcapturados en la naturaleza por hembras M del laboratorio) la descendencia híbrida es viable yaparentemente normal, aunque es estéril. En cruzamientos M x P (machos del laboratoriopor hembras capturadas en la naturaleza) la descendencia es normal y fértil en las sucesivasgeneraciones. Este diferente comportamiento de los híbridos en las dos direcciones delcruzamiento, se denomina Disgénesis híbrida y se debe a la activación de un elemento P en lalínea germinal.Los Retrovirus también pueden ser considerados como elementos genéticos móviles,presentando algunos una analogía con los elementos copia de Drosophila.
Parecido entre los retrovirus y transsposones de levaduras (Ty y 912) y Drosophila (Copia)Transposones en mamíferos:En mamíferos se conocen tres clases de secuencias que son capaces de transponerse ocambiar de posición a través de un ARN intermediario:Retrovirus endógenos: semejantes a los retrovirus, no pueden infectar nuevas células yestán restringidos a un genoma, pero pueden transponerse dentro de la célula. Poseenlargas secuencias repetidas en los extremos (LTR), genes env (con información para laproteína de la cubierta) y genes que codifican para la trasnrciptasa inversa, como lospresentes en retrovirus.Retrotransposones o retroposones: carecen de LTR y de los genes env (coninformación para la proteína de la cubierta) de retrovirus. Contienen genes para latranscriptasa inversa y pueden transponerse. Tienen una secuencia rica en pares A-T enun extremo. Un ejemplo, son los elementos LINE-1 (elementos largos dispersos) enhumanos y ratones.Retropseudogenes: carecen de genes para la transcriptasa inversa y por consiguienteson incapaces de transponerse de forma independiente, aunque si pueden cambiar deposición en presencia de otros elementos móviles que posean información para latrasncriptasa inversa. Poseen una región rica en pares A-T en un extremo y los hay dedos tipos:Pseudogenes procesados: están en bajo número de copias y derivan de genestranscritos por la ARN Poilimerasa II, siendo genes que codifican para polipéptidos.Estos pseudogenes procesados carecen de intrones.SINES (elementos cortos dispersos): están en alto número de copias enmamíferos. Dos ejemplos son la secuencia Alu de humanos y B1 de ratón, quederivan de genes transcritos por la ARN polimerasa III utilizando un promotorinterno.
Esquema de diferentes tipos transposones en mamíferosLa secuencia Alu es la más abundante en el genoma humano, existiendo 750.000 copiasdispersas por el genoma, aproximadamente existe una copia cada 4000 pb. Esta secuenciaposee un contenido relativamente alto en (G C) y presenta una elevada homología (70-80%)con la secuencia B1 de ratón. Se la denomina secuencia Alu por poseer en su interior unadiana para la endonucleasa de restricción Alu. Las secuencias Alu humanas tienen alrededorde 280 pb y están flanqueadas por repeticiones directas cortas (6-18 pb). Una secuencia típicaAlu es un dímero repetido en tandem, la unidad que se repite tiene un tamaño aproximado de120 pb y va seguida de una corta secuencia rica en pares A-T. Sin embargo, existe unaasimetría en las unidades repetidas, de manera que la segunda unidad contiene una secuenciade 32 pb ausente en la primera. Las unidades repetidas de la secuencia Alu muestran unelevado parecido con la secuencia del ARN 7SL, un componente que juega un papel importanteen el transporte de las proteínas a través de la membrana del retículo endoplasmático.MUTACIONES ESPONTÁNEAS Y ENFERMEDADES HUMANASEn el siguiente resumen se citan algunos ejemplos de mutaciones espontáneas en la especiehumana:Mutaciones de cambio de sentido, Mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura yMutaciones sin sentido.Deleciones entre secuencias repetidas.Expansiones de trinucleótidos.Mutaciones de cambio de sentido, Mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura yMutaciones sin sentido:Existen muchos ejemplos de este tipo de mutaciones en la especie humana. Muchos de loserrores congénitos del metabolismo se producen por mutaciones de cualquiera de los tres tiposanteriores. Algunos ejemplos de mutaciones de cambio de sentido son: la anemia falciformecon la aparición de la hemoglobina de tipo S (HbS), o la hemoglobina de tipo C (HbC). Otrosejemplos de alteraciones de este tipo son la Alcaptonuria (acumulación de ácido homogentísico
o alcaptón) y la fenilcetonuria (PKU).Deleciones entre secuencias repetidas:Encefalopatía mitocondrial: afecta al sistema nervioso central y a los músculos. Seproduce por un funcionamiento defectuoso de las fosforilación oxidativa. Este malfuncionamiento se produce consecuencia de una deleción de 5000 pares de bases delADN mitocondrial entre secuencias repetidas.Enfermedad de Fabry: afecta al catabolismo de los glicoesfingolípidos, el enzima αgalactosidasa cuyo gen está en el cromosoma X es defectuosa debido a una deleciónentre repeticiones directas de una secuencia corta.Deleción en el ADN mitocondrialExpansiones de trinucleótidos:En los genomas de las especies eucariontes existen secuencias cortas repetidas en tandem unnúmero variable de veces, que se denominan abreviadamente VNTRs (Variable NumberTandem Repeat). Las VNTRs se pueden clasificar a su vez en Minisatélites y Microsatélites enbase a la longitud de la secuencia repetida, en los Minisatélites la longitud de la secuencia quese repite es superior 10 bases, en los Microsatélites es inferior a 10. Los Microsatélites másfrecuentes son dinucleótidos repetidos muchas veces, por ejemplo: TCTCTCTCTCTCTCTC.También hay trinucleótidos repetidos muchas veces, por ejemplo, CGGCGGCGGCGGCGG.En las mutaciones producidas por expansiones de trinucleótidos el número normal derepeticiones de un determinado trinucleótido en una determinada posición del genoma (locus)se altera, aumentando su número de repeticiones. Un posible mecanismo propuesto paraexplicar este aumento en el número de repeticiones sería el "apareamiento erróneo deslizado",sin embargo, está hipótesis no explica incrementos demasiado grandes en el número derepeticiones. Algunos ejemplos de enfermedades producidos por expansiones de trinucleótidosen la especie humana son las siguientes:Síndrome X-frágil: es la causa más común de retraso mental en varones. El trinucleótidoque se repite en el cromosoma X en el locus (FRM-1) es CGG. El número normal derepeticiones oscila entre 6 y 50, existe un alelo premutacional con un número derepeticiones que varía entre 50 y 200 y la enfermedad se manifiesta cuando el número derepeticiones oscila entre 100 y 1.300.Corea de Huntington: enfermedad neurodegenerativa de la edad adulta, se suelemanifestar después de la época reproductiva. Este microsatélite se localiza cerca eltelómero del brazo corto del cromosoma 4, el trinucleótido repetido es CAG. El númeronormal de repeticiones oscila entre 11 y 34 y el número de repeticiones en los individuosenfermos varía entre 42 y 100. Se trata de una enfermedad con herencia autosómicadominante.
Distrofia miotónica: afecta al sistema nervioso central y al sistema muscular. Eltrinucleótido que se repite se localiza en el cromosoma 19 y es CAG, el número normal derepeticiones varía entre 5 y 35, las personas enfermas poseen entre 50 y 200repeticiones. También tiene herencia autosómica dominante.Atrofia muscular espino bulbar: microsatélite localizado en el cromosoma X. Eltrinucleótido repetido es CTG, el número normal de repeticiones oscila entre 11 y 31,mientras que las personas afectadas por esta enfermedad muestran entre 40 y 65repeticiones.Síndrome X frágil: expansión de trinucleótidosMUTAGÉNESIS INDUCIDAExisten diferentes agentes físicos y químicos que producen mutaciones en el ADN. Durante losprimeros tiempos de la Genética (1900 a 1930) los investigadores trataron de producirartificialmente mutaciones sin conseguirlo, hasta que Muller en 1927 y Stadler en 1928demostraron los efectos mutagénicos de los rayos X en Drosophila, maíz y cedbada.H. J. Muller recibió el Premio Nobel en 1946 por su descubrimiento de la inducción demutaciones mediante radiación con rayos X.H. J. MullerStadlerEntre los agentes físicos que producen mutaciones, están las radiaciones ionizantes (porejemplo los Rayos X) y las radiaciones no ionizantes (la luz ultravioleta).Las radiaciones ionizantes producen los siguientes efectos a nivel celular:Efectos genéticos: alteraciones en los genes.Efectos citogenéticos: alteraciones en los cromosomas: roturas cromosómicas y
translocaciones.Efectos fisiológicos: alteraciones en las enzimas y hormonas.Posteriormente, se demostró que otros agentes físicos y químicos producían mutaciones.ESPECIFICIDAD MUTACIONALLa especificidad mutacional significa que muchos agentes mutágenos tienden a producir undeterminado tipo de mutación, por ejemplo:Etilmetanosulfonato (EMS): produce fundamentalmente transiciones GC AT.Nitrosoguanidina (NG): produce esencialmente transversiones GC TA.Luz ultravioleta (UV): produce transiciones y transversiones.Especificidad mutacional del EMS, la luz UV y de la AflatoxinaMECANISMOS DE MUTAGÉNESISLos principales mecanismos por los que se producen las mutaciones son los siguientes:Remplazar una base en el ADN.
Mutágenos que alteran las bases produciendo emparejamientos erróneos específicos.Agentes de tipo intercalante.Mutágenos que producen pérdida del emparejamiento específico.Remplazar una base en el ADN: Los análogos de bases son compuestos químicos quepueden remplazar a una base determinada. Por ejemplo, el 5-Bromouracilo (5BU) es análogode la Timina (T) y puede remplazarla. El 5BU en su forma cetónica empareja con la Adenina (A)mientras que en su forma enólica (5BU*) empareja con la Guanina (G). El 5BU es más inestabley produce transiciones. La 2-Aminopurina (2AP) es análogo de la Adenina (A) y puederemplazarla. La 2AP aparea con la Timina (T) pero en su forma imíno (2AP*) empareja con laCitosina (C). Esta alteración produce transiciones.Mutágenos que alteran las bases produciendo emparejamientos erróneos específicos:existen varios tipos de agentes mutagénicos que alteran las bases nitrogenadas produciendoemparejamientos erróneosAgentes alquilantes: como el EMS que añade radicales etilo y produce transicionesGC AT. La NG añade radicales metilo y produce también transiciones GC AT.Hidroxilamina (HA): produce específicamente transiciones GC AT.Iones bisulfito y ácido nitroso: producen desaminación. El ácido nitroso transforma laCitosina (C) en Uracilo (U), el Uracilo (U) empareja con la Adenina (A) produciendotransiciones. La desaminación de las Adenina (A) la convierte en hipoxantina (H) queempareja con la Citosina (C) produciendo transiciones.Agentes de tipo intercalante como la Proflavina, Naranja de acridina y Compuestos ICR:son compuestos con estructuras planas que se meten o intercalan entre las bases nitrogenadasdel ADN produciendo adiciones o deleciones de un solo par de nucleótidos.Mutágenos que producen pérdida del emparejamiento específico: estos mutágenos dañanmuchas bases nitrogenadas y producen como consecuencia un bloqueo de la replicación delADN. La mayoría de los compuestos cancerígenos producen este tipo de alteraciones. Debidoa la gran cantidad de alteraciones que producen en el ADN como primera medida se produceun bloqueo de la replicación y se ponen en marcha un sistema de emergencia denominadoabreviadamente SOS para reparar los daños y permitir que la célula se replique y pueda seguirviviendo. El sistema SOS consta de al menos tres genes denominados recA, umuC y umuD.Este sistema produce un relajamiento de la especificidad de apareamiento de la ADNpolimerasa III de E. coli. Algunos ejemplos de esta situación son:Luz ultravioleta (UV): produce dímeros de pirimidinas. Cuando hay dos pirimidinassucesivas en la misma hélice la luz UV hace que se produzcan puente de hidrógeno entreambas. Los más frecuentes son los dímeros de Timinas.Aflatoxina B1: se une a la Guanina (G) modificándola de manera que la Guaninamodificada se separa del azúcar al que estaba unida produciendo una sede apurínica. Elsistema SOS pone habitualmente en la sede apurínica una Adenina (A) dando lugar atransversiones. Es un potente carcinógeno.Benzopireno: es un producto resultante de los motores de combustión y es un potentecarcinógeno.
2-Aminopurina2-IminopurinaMolécula intercalante5-BromouraciloTransición debida a 5-BUAflatoxina B1EMSAgentes intercalantesDímeros de TiminaREPARACIÓN DE LOS DAÑOS EN EL ADNCono hemos venido viendo hasta el momento, existen muchos agentes físicos y químicos quepueden producir lesiones en el ADN. Por tanto, deben existir mecanismos que permitanprevenir y reparar los daños que se producen en el material hereditario tanto de formaespontánea como los inducidos.Como ya hemos visto cuando hablamos de la replicación del ADN, la propia ADN polimerasa IIIposee la subunidad ε que tiene una función correctora de pruebas que permite detectar cuandola ADN polimerasa ha introducido un nucleótido que no es el correcto y retirarlo. Este es unprimer mecanismo que evita que se produzcan mutaciones durante la replicación. Además deeste mecanismo existen otros que previenen posibles daños y que reparan las lesionesproducidas:Sistemas que ev
Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de regiones relativamente grandes también se han detectado con bastante frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli se han detectado deleciones grandes que tienen lugar entre secuencias repetidas. Se cree que estas mutaciones podrían
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