Sintesis Dan Uji Toksisitas Senyawa Analog Kalkon Turunan 2 . - Core

Jurnal PhotonVol. 5 No.1, Oktober 2014SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKONTURUNAN 2’-HIDROKSIASETOFENON DAN HALOBENZALDEHIDIhsan Ikhtiarudin, Lelani, Adel Zamri, Hilwan Yuda Teruna, YuharmenGrup Riset Sintesis Organik, Jurusan Kimia, FMIPA, Unversitas RiauEmail: ihsan ikhtiarudin@yahoo.comABSTRAKKalkon merupakan senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid yang terdapat pada beberapa jenis tumbuhan.Senyawa ini dikenal memiliki berbagai bioaktivitas yang menarik. Dalam bidang sintesis, senyawa ini digunakanuntuk mensintesis berbagai macam senyawa heterosiklik seperti benzodiazepin, pirazolin, flavanon, flavonol, dansenyawa turunan kalkon lainnya yang juga memiliki bioaktivitas yang menarik. Oleh karena itu, senyawa inibanyak dijadikan sebagai molekul target untuk keperluan pencarian senyawa-senyawa aktif sebagai kandidat obat,salah satunya adalah sebagai obat antikanker. Pada penelitian ini, tiga analog kalkon turunan 2’-hidroksiasetofenondan halobenzaldehid telah disintesis menggunakan metode stirer dengan katalis KOH dan pelarut PEG-400. Struktursetiap produk dikarakterisasi dengan spektroskopi UV-Vis, FTIR, 1H NMR, 13C NMR, dan HRMS. Uji toksisitasdilakukan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Berdasarkan hasil uji BSLT, ketiga senyawatersebut berpotensi sebagai senyawa antikanker dengan nilai LC50 200 µg/mL.Kata Kunci: kalkon, uji toksisitas, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)1. PENDAHULUANKanker merupakan penyakit yang ditandaidengan pertumbuhan yang tidak terkontrol darisel-sel abnormal dan menjadi masalah utama diseluruh dunia. Penyakit ini adalah penyakit fataldan diprediksikan sebagai salah satu penyakitpenyebab utama kematian di masa depan.Meskipun penelitian tentang kanker telahmenghasilkan sejumlah solusi baru, obat-obatanyang digunakan dalam pengobatan kanker masihmemiliki banyak keterbatasan. Oleh karena itu,hingga saat ini penelitian yang berhubungandengan penemuan obat antikanker baru yangampuh, aman dan selektif masih terus dilakukanoleh para peneliti.Kalkon merupakan senyawa metabolitsekunder golongan flavonoid yang dapatditemukan pada beberapa jenis tumbuhan.Senyawa kalkon dan turunannya dikenalmemiliki beragam aktivitas biologi yangmenarik, seperti antimikroba (Tiwari et al.,FMIPA-UMRI2010), antimalaria, antioksidan, antitumor(Prasad et al., 2006), anti-inflamasi (Yadav etal., 2011), antikanker (Syam et al., 2012) danlain sebagainya. Dalam bidang sintesis, senyawakalkon telah banyak digunakan untuk membuatberbagai macam senyawa heterosiklik (Tiwari etal., 2010) seperti isoksazol, quinolinon,tiadiazin, benzodiazepin, flavon (Jayapal et al.,2010b), ketimin , tak jenuh (Lonkar et al.,2011), pirazolin dan turunannya (Sharshira &Hamada, 2011; Sing et al., 2009), flavonol(Britton et al., 2012; Jadhav et al., 2008),flavanonol (Patil, 2012) flavanon (Kulkarni,2012) dan senyawa turunan lainnya (Gambar 9)yang juga memiliki aktivitas biologi yangmenarik. Oleh karena itu, senyawa-senyawaanalog kalkon dan turunannya banyak dijadikansebagai molekul target untuk keperluanpencarian senyawa-senyawa aktif sebagaikandidat obat, salah satunya adalah sebagai obatantikanker.57

Vol. 5 No.1, Oktober 2014Jurnal PhotonGambar 4. Berbagai senyawa turunan 2’-hidroksikalkonAktivitas biologis kalkon, selain disebabkanoleh gugus karbonil α,β tak jenuh, jugadipengaruhi oleh subtituen yang terikat padakedua cincin aromatik (Kamble et al., 2011).Oleh karena itu, variasi subtituen pada cincinaromatik akan menghasilkan kalkon denganstruktur yang beragam. Kalkon dengan variasistruktur yang luas hanya dapat diperoleh melaluisintesis secara kombinatorial. Untuk maksudtersebut, penulis telah mencanangkan programsintesis 100 molekul kalkon untuk dipelajarisifat fisiko-kimia dan bioaktivitasnya. Padapenelitian ini hanya dillaporkan sintesis tigaanalog kalkon menggunakan senyawa awal 2’hidroksiasetofenon dan halobenzaldehid.Salah satu metode baru untuk sintesis analog2’-hidroksikalkon adalah dengan penggunaanPEG-400 (polietilenglikol–400) sebagai pelarutalternatif. Penggunaan PEG-400 ini bertujuanuntuk mengurangi penggunaan pelarut organikvolatil (Jayapal et al., 2010b), sehingga dapatdikatakan lebih ramah lingkungan. Sintesisdilakukan melalui reaksi kondensasi ClaisenSchmidt menggunakan bahan baku yang tersediadi pasaran. Reaksi ini juga telah dikenal sebagai58reaksi yang ramah lingkungan. Sintesismenggunakan pendekatan metode ramahlingkungan yang dibantu dengan penggunaanpelarut non volatil ini dilakukan untukmeningkatkan efisiensi dalam produksi danmengurangidampaknegatifterhadaplingkungan.Ada dua masalah utama dalam mensintesisanalog 2’-hidroksikalkon. Pertama, rendemenyang dihasilkan sedikit. Hal ini dikarenakanterjadinya reaksi pembentukan produk sampingberupa senyawa flavanon akibat siklisasi produk2’-hidroksikalkon (Patil et al., 2009; Stoyanov etal., 2002). Kedua, adanya substituen hidroksipada cincin aromatik reaktan dapat menurunkanefektifitas dari katalis basa yang digunakan(Patil et al., 2009). Selain menyerang hidrogen yang bersifat asam, katalis basa juga dapatmenyerang hidrogen fenolik pada reaktan yangjuga bersifat asam, sehingga dapat menghambatproses pembentukan ion enolat. Oleh karena itu,untuk mensintesis analog kalkon dengansubstituen hidroksi diperlukan konsentrasikatalis basa yang lebih tinggi dibandingkandengan konsentrasi reaktannya.FMIPA-UMRI

Jurnal PhotonSenyawa hasil sintesis dikarakterisasiberdasarkan interpretasi data spektroskopi UVVis, FTIR, 1H NMR, 13C NMR, dan HRMSkemudian diuji sifat toksiknya dengan metodeBrine Shrimp Lethality Test (BSLT). Uji BSLTmerupakan salah satu teknik pendahuluan untukmenentukan letalitas atau toksisitas suatusenyawa. Uji ini merupakan uji pendahuluanuntuk menentukan aktivitas antikanker darisuatu senyawa. Hal ini didasarkan padapemikiran bahwa sebagian besar senyawaantikanker adalah bersifat toksik. Pengujianletalitas sederhana ini tidak spesifik untukantikanker, tetapi merupakan indikator sitotoksikyang baik (Meyer et al., 1982). Berdasarkanmetode BSLT, suatu tanaman atau hasil isolasidianggap menunjukkan aktivitas sitotoksik bilamempunyai nilai LC50 kecil dari 1000 ppm,sedangkan untuk senyawa murni i nilai LC50 kecil dari 200 ppm(Anderson et al., 1991)2. METODOLOGI PENELITIANBahan dan PeralatanBahan-bahan yang digunakan dalampenelitian ini adalah 2’-hidroksi asetofenon(Merck), 2-klorobenzaldehid (Merck), 3bromobenzaldehid (Merck), ck),dimetilsulfoksida (Merck), kalium hidroksida(Merck), asam klorida 1 N, telur udang (Artemiasalina Leach), air laut dan pelarut-pelarut organikyang umum digunakan.Alat-alat yang digunakan dalam penelitianini adalah alat pengukur titik leleh (Fisher John),HPLC (Shimadzu LCsolution, jenis kolom ShimPack VP-ODS dengan panjang dan diameternya150 x 4,6 mm), spektrofotometer UV-Vis(Genesys 10S UV-VIS v4.002 2L9N175013),spektrofotometer FTIR (Shimadzu, IR Prestige21), spektroskopi 1H NMR dan 13C NMR(Agilent 500 MHz) di Institut TeknologiBandung, spektroskopi massa (MS water LCTpremier XE positive mode) di Institut TeknologiBandung, alat-alat untuk sintesis dan uji toksisitasyang umum digunakan di laboratorium.FMIPA-UMRIVol. 5 No.1, Oktober 2014Prosedur Kerja Sintesis2’-hidroksiasetofenon (5 mmol) dan masingmasing halobenzaldehid (5 mmol) dilarutkandengan dalam 5 mL PEG-400 di dalam labu bulatyang telah dilengkapi magnet stirrer, kemudiandistirer selama 2 menit. Setelah itu, sebanyak 15mmol KOH padat ditambahkan ke dalam labuyang berisi campuran reaktan tersebut, kemudiandistirer selama 8-12 jam. Tahapan reaksi dipantaumelalui uji KLT. Setelah reaksi selesai, ke dalamcampuran reaksi ditambahkan HCl 1N dinginsebanyak 10 mL atau hingga pH netral danterbentuk endapan. Endapan disaring dengancorong bunchner, kemudian dicuci denganakuades dan n-heksan dingin. Selanjutnya Crudeproduct diuji KLT, jika terdapat lebih dari satunoda, maka dilakukan rekristalisasi denganEtOAc panas dan n-heksan untuk mendapatkansenyawa murni.Uji Toksisitas dengan Metode BrineShrimp Lethality Test (BSLT)Uji toksisitas dengan metode BSLTdilakukan berdasarkan metode yang telahdilakukan oleh Meyer et al. (1982). Kista udangA. salina ditetaskan dalam wadah pembiakanyang berisi air laut, dan digunakan setelah aerasiselama 48 jam (setelah terbentuk larva). Vial ujidikalibrasi dengan 5 mL aquades. Pengujiandilakukan dengan konsentrasi 100, 10 dan 1μg/mL masing-masing dengan tiga kalipengulangan. Sampel sebanyak 20 mg dilarutkandalam 2 mL metanol (larutan induk, konsentrasi10000 μg/mL), kemudian dari larutan indukdibuat konsentrasi larutan uji 100 μg/mL, 10μg/mL, dan 1 μg/mL dengan cara pengenceranbertingkat. Sampel dipipet kedalam masingmasing vial sebanyak 0,5 mL, lalu pelarutdiuapkan hingga mengering. Selanjutnya,ditambahkan 50 μL DMSO, 10 ekor larvaArtemia salina Leach dan air laut sampai bataskalibrasi 5 mL. Kematian larva dihitung dalamselang waktu 24 jam. Pengujian dilakukansebanyak tiga kali pengulangan dengan perlakuanyang sama untuk masing-masing konsentrasi.Data yang diperoleh dianalisis untuk menentukannilai LC50 dengan metode kurva menggunakantabel analisis probit (Harefa, 1997).59

Vol. 5 No.1, Oktober 2014Jurnal Photon3. HASIL DAN PEMBAHASANSintesis dilakukan menggunakan metodestirer dengan katalis KOH padat dan pelarutPEG-400 pada suhu ruangan. Skema reaksisintesis senyawa kalkon tersebut dapat dilihatpada Gambar 10.Rendemen yang dihasilkan cukup baik(56-80%). Kemurnian senyawa kalkon hasilsintesis ditentukan melalui uji KLT, uji titikleleh, dan analisis HPLC. Uji KLT dilakukanmenggunakan eluen n-heksana:etil asetat(9:1) menunjukkan satu noda. Uji titik lelehmenunjukkan kisaran titik leleh 2oC.AnalisiskemurniandenganHPLCmanghasilkan kromatogram dengan satupuncak dominan pada tR 16 menit untuksenyawa (1), tR 17 menit untuk senyawa (2),dan tR 16,20 menit untuk senyawa (3). SifatFisik senyawa (1)-(3) dapat dilihat padaTabel 1.(1)R1 Cl,R2 H, R3 H(2)R1 H,R2 Br,R3 H(3)R1 H,R2 H, R3 ClGambar 1. Reaksi sintesis senyawa kalkon turunan 2’-hidroksiasetofenonTabel 1. Sifat fisik senyawa analog kalkon 537Rendemen(%)566280Spektrum UV senyawa (1)-(3) dalam pelarutmethanol (MeOH) sebagaimana dapat dilihatpada Gambar 2 berturut-turut memperlihatkanadanya serapan maksimum pada λ 208 nm dan309 nm dan puncak bahu pada 232 nm dan 366nm untuk senyawa (1), serapan maksimum padaλ 205 nm dan 319 nm dan puncak bahu pada 225nm dan 364 nm untuk senyawa (2), serapanmaksimum pada λ 204 nm dan 319 nm danpuncak bahu pada 223 nm dan 365 nm untuksenyawa (3) menunjukkan adanya ikatanrangkap terkonjugasi yang merupakan ciri khasdari senyawa kalkon.SpektrumFTIRsenyawa(1)-(3)memperlihatkan adanya serapan pada bilangangelombang (cm-1) 1640-1644 mengindikasikanadanya gugus C O terkonjugasi dengan ikatan60WarnaKuningKuningOrangeTitik leleh(oC)84-8582-8380-81Rf(n-heksan:EtOAc)0,51 (9:1)0,61 (9:1)0,64 (9:1)rangkap α,β tak jenuh. Serapan pada bilangangelombang 1578-1583 mengindikasikan adanyaikatan C C alkena yang terkonjugasi dengankarbonil dan cincin aromatik. Serapan padabilangangelombang3067-3086mengindikasikan adanya ikatan C-H aromatik.Serapan pada bilangan gelombang 2937-2958mengindikasikan adanya ikatan C–H alifatik.Serapan pada bilangan gelombang 1204-1206mengindikasikan adanya ikatan C–O alkohol.Vibrasi ikatan C–X pada senyawa (1)-(3)masing-masing ditunjukkan pada bilangangelombang (cm-1) 751 (C-Cl) 673 (C-Br), dan761 (C-Cl). Serapan pada daerah bilangangelombang tersebut sangat sesuai untukmendeskripsikan gugus fungsi yang terdapatpada ketiga senyawa kalkon.FMIPA-UMRI